注意事项: 1、DNA浓度>1mg/ml时清除内毒素效率降低。由于DNA和蛋白质本身的性质,清除程序可导致10-20%DNA丢 失,所幸的是与清除内毒素的艰难相比DNA更容易提取制备。 2、所有溶液应用无内毒素的高纯水配制,所有器械材料均应不含内毒素,玻璃器皿可高温烘烤,非挥发性水 溶液可高压120℃高温处理。 内毒素简介: 内毒素(endotoxin)原称热原,是革兰氏阴性菌细胞壁外膜及其它微生物细胞壁的主要组成成分,其化学本质为脂多糖, 主要由O-特异性链、核心多糖和类脂A三部分组成。脂多糖共价连接到非极性的疏水性类脂A(Lipid A)形成带负电荷的大分 子,同时还具有一个亲水性的寡糖核,因而具有疏水和亲水双重性质。制备质粒DNA和重组蛋白时,细菌破壁之后将释放大 量脂多糖。无论是普通制备纯化程序,还是离子交换、凝胶排阻过滤,甚是氯化铯超速离心等制备程序,脂多糖不可 避免地与DNA或蛋白质牢固结合而被共同纯化。脂多糖具有强烈的免疫活性和细胞毒性,并能产生多种复杂的细胞生物学效 应,大多数情况下会明显干扰并产生不可预测的实验结果。例如在DNA转染实验中,内毒素竞争性干扰转染试剂与DNA的结 合,显著降低转染效率,并产生明显细胞毒性,降低外源 |