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活性氧检测试检测的工作流程步骤
2025-09-10
活性氧检测试检测的工作流程步骤活性氧检测试检测流程：从探针加载到信号输出探针加载（细胞预处理）步骤：将细胞接种于培养板（如96孔板），待贴壁后更换无血清培养基（避免血清干扰）。加入终浓度为5-20μM的探针（如DCFH-DA），37℃孵育20-30分钟。关键点：探针浓度需优化：过高导致背景噪声，过低降低灵敏度。避光操作：荧光探针易被光淬灭，需用锡箔纸包裹培养板。ROS诱导（刺激处理）目的：人为提高细胞内ROS水平，模拟病理或应激状态。常用刺激物：氧化剂：H₂O₂（100-50...
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RNA的提取方法大总结
2025-09-02
这篇文章主要讲的是几种常用的RNA提取方法。1、异硫氰酸胍氯化铯超速离心法原理：使用蛋白质变性剂异硫氰酸胍有效抑制RNA酶的活性，经过起始密度为1.78g/ml的氯化铯介质，进行密度梯度超速离心，RNA沉淀于管底，而DNA与蛋白质在上清中。使用这种方法，不但能得到高质量的RNA，而且能同时分离出细胞染色体DNA.本法对于冷冻时间长、细胞质和细胞核不易分离的组织标本以及富含RNA酶的组织细胞（如胰腺）的RNA提取尤其适合。此法提取的RNA的质量好和成功率高，已成为提取哺乳动物细...
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从琼脂糖凝胶中回收DNA片段的原则和注意事项
2025-09-02
在分子生物学实验中，我们通常需要分离纯化特定分子量的DNA片段，用于接下来的实验，比如酶切、连接的工作。下面主要介绍从琼脂糖凝胶中回收DNA片段的原则和注意事项，其主要原则有两项：1、去除DNA样品中的杂质：琼脂糖是从琼脂中提取出来的，其中含有较多的酸根和羟基多糖。目前大多数级别的琼脂糖中含有硫酸酯多糖，这种物质能抑制基因克隆中使用的多种工具酶的活性，如DNA限制性内切酶、连接酶等，在回收DNA时应尽量减少这些物质的污染。不管用哪种方法进行回收DNA，都会用到2.5mol/L...
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几种感受态细胞的用途、基因型和特点
2025-09-02
1、DH5菌株用途:克隆菌，用于分子克隆、质粒提取。基因型:supE44△lacU169（?80lacZ△M15）hsdR17recAlendAlgyrA19thi-1relAl特点:一种用于铺制与培养质粒平板和粘性平板的抑制型菌株.其?80lacZ△M15基因的产物可与pUC载体编码的β-半乳糖苷酶氨基端实现α互补，可用于蓝白斑筛选。recAl和endAl的突变有利于克隆DNA的稳定和高纯度质粒的提取。2、TOP-10菌株用途：克隆菌，用于分子克隆，质粒提取。基因型：F_m...
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核酸电泳之聚丙烯酰氨凝胶电泳
2025-09-02
核酸电泳，想必大家耳熟能详的就是琼脂糖凝胶电泳了。今天我们要来讲讲另外一个跑核酸的方法--聚丙烯酰氨凝胶电泳。对于聚丙烯酰氨凝胶电泳，想必大家第一反应是蛋白质的电泳，再就是伯乐的电泳设备了。是的，蛋白电泳和伯乐电泳设备都是我们熟悉的。来看看DNA的聚丙烯酰氨凝胶电泳吧。看看胶的配置有什么不同呢？20%的变性聚丙烯酰胺凝胶8ml；尿素3.36g，加入45%丙烯酰胺溶液3.56ml，5XTBE1.6ml，加热是尿素溶解,加水至8ml，将两者混匀后冷却至室温。再加入3-6ul的TE...
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提取DNA的方法总结与比较
2025-09-02
dna提取是一项经常要做的实验，下面我们就总结了四种dna提取方法并做详细说明和比较。一.浓盐法提取dna：A.利用RNA和DNA在电解溶液中溶解度不同，将二者分离，常用的方法是用1M氯纳提取化钠抽提,得到的DNP粘液与含有少量辛醇的氯仿一起摇荡,使乳化,再离心除去蛋白质,此时蛋白质凝胶停留在水相及氯仿相中间，而DNA位于上层水相中,用2倍体积95%乙醇可将DNA钠盐沉淀出来.B.也可用0.15MNaCL液反复洗涤细胞破碎液除去RNP,再以1MNaCL提取脱氧核糖蛋白,再按氯...
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索莱宝试剂盒提取植物dna步骤
2025-09-01
试剂盒提取植物dna已经获得广泛应用。各个生化试剂厂家也都有了dna提取试剂盒产品。索莱宝作为国内生化试剂供应商提供了各类dna提取试剂盒。今天给大家介绍试剂盒提取植物dna步骤。当然是以索莱宝产植物基因组dna提取试剂盒产品为例。使用前先在漂洗液中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶体上的标签。所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。1、植物组织预处理：取新鲜植物组织（不超过100mg）或干重组织（不超过20mg），于液氮中充分研磨至细粉状，让液氮自然挥发。2、将研磨好的植物...
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RNAwait(非冻型组织RNA保存液)的作用
2025-09-01
RNAwait是一种无毒的可直接使用的样品储存液，能使细胞内的RNA与RNA酶分离，可以快速可靠地保存动物组织、细胞内的RNA。组织获取后立即浸入RNAwait保存液中，在室温可以保存7天，4℃可以保存4周，-20℃、-80℃标本可以长期保存，RNA稳定存在不降解，取出后用各类方法抽提可以获得高质量的RNA。操作流程：1.根据要保存的各样本的体积，计算出所需RNAwait用量。RNAwait的用量应当是组织体积的10倍（如100mg组织约用1mlRNAwait）。2.将RNA...
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