核蛋白抽提试剂盒

对于体外培养细胞：
1．根据用量取适当的浆蛋白抽提试剂和核蛋白抽提试剂加入 PMSF，使 PMSF 的终浓度为 1mM。PMSF
需现用现加，若目标蛋白含有丰富的半胱氨酸，可以在两种蛋白抽提液中加入 DTT 终浓度 0.5mM。
2．对于贴壁细胞，去除培养液，用 PBS 洗一遍，用细胞刮刀收集细胞，或用 EDTA 消化后吹打下细胞（好不用胰酶硝化，以免过度消化蛋白）。500 g 离心 2～3 分钟收集细胞，吸尽上清留下沉淀备用。
3．对于悬浮细胞：用 PBS 洗一遍，500 g 离心 2～3 分钟收集细胞，吸尽上清，留下细胞沉淀备用。
4．按照每 20ul 细胞沉淀加入 200ul 浆蛋白抽提试剂的比例加入裂解液。
5．高速剧烈涡旋 15 秒，使细胞*分散开。若沉淀没有*分散，可以适当延长涡旋时间。
6．500 g 离心 2～3 分钟，去上清。
7．加入浆蛋白抽提试剂 200ul，高速剧烈涡旋 5 秒，冰浴 10 分钟。
8．高速剧烈涡旋 5 秒，4℃12000～16000g 离心 10 分钟。
9．上清即为抽提得到的细胞浆蛋白。可进行后续的 PAGE、Western，但蛋白浓度很低，可能需要浓缩。
10．*吸尽残余的上清，避免细胞浆蛋白污染，加入 100ul 核蛋白抽提试剂。
11．高速涡旋 15 秒或用移液器吹打*分散,放回冰浴中 5 分钟，4℃12000～16000g 离心 10 分钟。
12．立即吸取上清预冷的样品管中，此即为抽提得到的细胞核蛋白。可进行后续实验或-70℃冻存。
对于组织样品：
把组织称重后，尽可能切成非常细小的碎片，按每 50mg 组织加入 200ul-500ul PBS，用匀浆器冰上匀浆匀浆制成细胞悬液，500 g 离心 2～3 分钟收集细胞，吸尽上清，收集沉淀。加入 200ul 浆蛋白抽提试剂后接上述步骤 5