产品名称:: 谷氨酸脱氢酶(GDH)活性检测试剂盒产品英文名: Glutamic Acid Dehydrogenase(GDH)Assay Kit产品货号:BC1460 产地:北京市通州区马驹桥联东U谷8三楼产品规格:50管/48样 产品商标:solarbio 保存与运输:4℃保存或-20℃保存; 参考价格:650 库存状态:现货 关键字: 谷氨酸脱氢酶检测试剂盒|GDH检测试剂盒|谷氨酸脱氢酶|试剂盒
简要介绍: GDH(EC 1.4.1.2)广泛分布于植物中,和谷氨酸合成酶(GOGAT)共同参与谷氨酸的合成,在氨同化和转化成有机氮化合物的代谢中起重要作用。 GDH催化NH4+、α-酮戊二酸和NADH,生成谷氨酸和NAD+,引起340nm吸光度下降。通过测定340nm吸光度的下降速率,计算GDH活性。
产品详细描述 产品内容: 提取液:液体60mL×1瓶,4℃保存; 试剂一:液体60mL×1瓶,4℃保存; 试剂二:粉剂×1瓶,-20℃保存。 产品说明: GDH(EC 1.4.1.2)广泛分布于植物中,和谷氨酸合成酶(GOGAT)共同参与谷氨酸的合成,在氨同化和转化成有机氮化合物的代谢中起重要作用。 GDH催化NH4+、α-酮戊二酸和NADH,生成谷氨酸和NAD+,引起340nm吸光度下降。通过测定340nm吸光度的下降速率,计算GDH活性。 需自备的仪器和用品: 紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、移液器、1mL石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。 操作步骤: 一、粗酶液提取: 1、收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照每500万细菌或细胞加入1mL提取液,超声波破碎细菌或细胞(功率20%,超声3秒,间隔10秒,重复30次);8000g4℃离心10分钟,取上清,置冰上待测。 2、称取约0.1g组织,加入1mL提取液进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10分钟,取上清,置冰上待测。 二、测定步骤: - 紫外分光光度计预热30min以上,调节波长340nm,蒸馏水调零。
- 样本测定
(1)工作液的配制:临用前将试剂一加入试剂二中混合溶解,置于37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)水浴5min; (2)取1mL工作液和0.05mL样本于光径为1cm的1mL石英比色皿中,混匀,加样本的同时开始计时,在340 nm波长下记录20秒时的初始吸光度A1和5分20秒时的吸光度A2,计算ΔA=A1-A2。注:当ΔA大于0.5时,将样本进行稀释后测量。 三、GDH活性计算: (1)按样本蛋白浓度计算: 单位的定义:每mg组织蛋白每分钟消耗1 nmol NADH定义为一个酶活力单位。 GDH(U/mg prot)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(Cpr×V样) ÷T=675×ΔA÷Cpr (2)按样本鲜重计算: 单位的定义:每g组织每分钟消耗1 nmol NADH定义为一个酶活力单位。 GDH(U/g 鲜重)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(V样÷V样总×W)÷T=675×ΔA÷W (3)按细菌或细胞密度计算: 单位的定义:每1万个细菌或细胞每分钟消耗1 nmol NADH定义为一个酶活力单位。 GDH(U/104 cell)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(V样÷V样总×500)÷T=1.35×ΔA V反总:反应体系总体积,1.05×10-3 L;ε:NADH摩尔消光系数,6.22×103 L / mol /cm;d:比色皿光径,1cm;V样:加入样本体积,0.05 mL;V样总:加入提取液体积,1 mL;T:反应时间,5 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样品质量,g;500:细菌或细胞总数,500万。
相关文献: 《Knockout of SlSBPASE Suppresses Carbon Assimilation and Alters Nitrogen Metabolism in Tomato Plants》 作者:Fei Ding, Qiannan Hu, Meiling Wang and Shuoxin Zhang 期刊:International Journal of Molecular Sciences 影响因子:4.183 PMID:30558146 谷氨酸脱氢酶(GDH)活性检测试剂盒 |