辅酶ⅡNADP(H)含量检测试剂盒 可见分光光度法 注意:正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定 BC1100 50T/24S 酸性提取液:50mL×1 瓶,4℃保存; 碱性提取液:50mL×1 瓶,4℃保存; 试剂一:基质缓冲液 15mL×1 瓶,4℃保存; 试剂二:粉剂×1 支,-20℃保存,用时加入 4mL 双蒸水,混匀; 试剂三:粉剂×1 支,-20℃保存,用时加入 4mL 双蒸水,混匀; 试剂四:粉剂×1 支,4 ℃保存,用时加入 4mL 双蒸水,混匀; 试剂五:液体 1.8mL×1 支,4 ℃保存; 试剂六:液体 30mL×1 瓶,4 ℃保存; 试剂七:液体 50mL×1 瓶,4 ℃保存。 一、NADP 和 NADPH 的提取: 1、血清(浆)中 NADP 和 NADPH 的提取: NADP 的提取:取 0.1mL 血清(浆),加入 0.9 mL 酸性提取液,煮沸 5min(盖紧);冰浴冷却后,10000g 4℃离心 10min;取上清加入等体积碱性提取液使之中和;混匀,10000g 4℃离心 10min,取上清,冰上保存待测。 NADH 的提取:取 0.1mL 血清(浆),加入 0.9 mL 碱性提取液,煮沸 5min,冰浴中冷却后,10000g 4℃离心10min,取上清加入等体积酸性提取液使之中和;混匀,10000g 4℃离心 10min,取上清,冰上保存待测。 2、组织中 NADP 和 NADPH 的提取: NADP 的提取:称取约 0.1g 组织,加入 0.9 mL 酸性提取液,冰浴研磨,煮沸 5min(盖紧),冰浴冷却后,10000g4℃离心 10min,取上清加入等体积碱性提取液混匀,10000g 4℃离心 10min,取上清,冰上保存待测。 NADPH 的提取:称取约 0.1g 组织,加入 0.9 mL 碱性提取液,冰浴研磨,煮沸 5min(盖紧),冰浴冷却后,10000g4℃离心 10min,取上清加入等体积酸性提取液混匀,10000g 4℃离心 10min,取上清,冰上保存待测。 3、细胞或细菌中 NADP 和 NADPH 的提取: NADP 的提取:收集 400-500 万细胞或细菌,加入 0.9 mL 酸性提取液,超声波破碎 1min(强度 20%或 200W,超声 2s,停 1s),煮沸 5min(盖紧,以防止水分散失),冰浴中冷却后,10000g 4 ℃离心 10min,取上清液另一新的离心管中,加入等体积的碱性提取液使之中和,混匀,冰上保存待测。 NADH 的提取:收集 400-500 万细胞或细菌,加入 0.9 mL 碱性提取液,超声波破碎 1min(强度 20%或 200W,超声 2s,停 1s),煮沸 5min(盖紧,以防止水分散失),冰浴中冷却后,10000g 4 ℃离心 10min,取上清液另一新的离心管中,加入等体积的酸性提取液使之中和,混匀,冰上保存待测 辅酶ⅡNADP(H)含量检测试剂盒 |