Ca++Mg++ ——ATP酶活性检测试剂盒 产品英文名:Ca++Mg++ ——ATPase Assay Kit产品货号:BC0960 产地:北京市通州区马驹桥联东U谷8三楼产品规格:50管/24样 产品商标:solarbio 保存与运输:4℃保存或-20℃保存; 参考价格:260 库存状态:现货 关键字:ATP酶活性检测试剂盒|ATP检测试剂盒|
简要介绍: Ca++ Mg++-ATP 酶广泛分布于植物、动物、微生物和细胞中,可催化ATP 水解生成ADP 和无机磷。 根据Ca++ Mg++-ATP 酶分解ATP 生成ADP 及无机磷,通过测定无机磷的量来确定ATP 酶活性高低。
产品详细描述 产品内容: 试剂一:液体30mL×1 瓶,4℃保存。 试剂二:液体4mL×1 瓶,4℃保存。 试剂三:粉剂×2支,-20℃保存;临用前加入1mL蒸馏水充分混匀待用,现用现配。用不完的试剂-20℃可保存一周。 试剂四:液体2mL×1 瓶,4℃保存。 试剂五:粉剂×1瓶,4℃保存。用时加入3mL双蒸水, 4℃保存。 试剂六:粉剂×1瓶, 4℃保存。用时加入15mL双蒸水,溶解后4℃保存一周。 试剂七:粉剂×1瓶, 4℃保存。用时加入15mL双蒸水,溶解后4℃保存一周。 试剂八:液体15mL×1 瓶,室温保存。 标准品:10mmol/L 标准磷贮备液1mL×1 支,4℃保存。 0.5μmol/mL 标准磷应用液配制:将标准品 20倍稀释,即取0.1mL标准品加1.9mL蒸馏水充分混匀。 定磷剂的配制:按H2O: 试剂六:试剂七:试剂八=2:1:1:1 的比例配制,配好的定磷剂应为浅黄色。若无色则试剂失效,若是蓝色则为磷污染,定磷剂现用现配。 注意:配试剂用新的烧杯、玻棒和玻璃移液器,也可以用一次性塑料器皿,避免磷污染。 产品说明: Ca++ Mg++-ATP酶广泛分布于植物、动物、微生物和细胞中,可催化ATP水解生成ADP和无机磷。 根据Ca++ Mg++-ATP酶分解ATP生成ADP及无机磷,通过测定无机磷的量来确定ATP酶活性高低。 需自备的仪器及用品: 可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。 操作步骤: 一、样品酶液的制备: 1、细菌、细胞或组织样品的制备: 细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照每500万细菌或细胞加入1mL试剂一,超声波破碎细菌或细胞(功率20%,超声3s,间隔10s,重复30次);8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。 组织:称取约0.1g组织,加入1mL试剂一进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。 2、血清(浆)样品:直接检测。 二、测定步骤: 1、分光光度计预热30min以上,调节波长660nm,蒸馏水调零。 2、酶促反应(在EP管中加入下列试剂) | 对照管 | 测定管 | 试剂一(μL) | 130 | 90 | 试剂二(μL) | 80 | 80 | 试剂三(μL) | 40 | 40 | 试剂四(μL) | | 40 | 样品(μL) | | 200 | 混匀,37℃(哺乳动物)或25℃(其他物种)准确水浴10min | 试剂五(μL) | 50 | 50 | 样品(μL) | 200 | | 混匀,4000g,常温离心10min,取上清液 |
3定磷(1.5mLEP管中依次加入下列试剂) | 空白管 | 标准管 | 对照管 | 测定管 | 0.5μmol/ml标准磷应用液(μL) | | 100 | | | 上清液(μL) | | | 100 | 100 | 蒸馏水(μL) | 100 | | | | 定磷试剂(μL) | 1000 | 1000 | 1000 | 1000 |
混匀,40℃水浴10 min,冷却室温,在 660nm处比色。 三、计算 1、血清(浆)Ca++ Mg++- ATPase活力的计算: 定义:规定每小时每毫升血清(浆)中Ca++ Mg++- ATP 酶分解ATP 产生1μmol无机磷的量为一个酶活力单位。 Ca++ Mg++-ATP酶活力(U/mL)= C标准管×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)×V总÷V样÷T=7.5×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管) 2、组织、细菌或细胞中Ca++ Mg++- ATPase活力的计算: (1)按蛋白浓度计算: 定义:规定每小时每毫克组织蛋白中Ca++ Mg++- ATP 酶分解ATP 产生1μmol无机磷的量为一个酶活力单位。 Ca++ Mg++-ATP酶活力(U/ mg)= C标准管×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)×V总÷(Cpr×V样)÷T=7.5×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)÷Cpr (2)按样本鲜重计算: 定义:规定每小时每克组织中Ca++ Mg++-ATP 酶分解ATP 产生1μmol无机磷的量为一个酶活力单位。 Ca++ Mg++-ATP酶活力(U/g)= C标准管×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)×V总÷(V样÷V样总×W)÷T=7.5×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)÷W (3)按细菌或细胞密度计算: 定义:规定每小时每1万个细菌或细胞中Ca++ Mg++-ATP 酶分解ATP 产生1μmol无机磷的量为一个酶活力单位。 Ca++ Mg++-ATP酶活力(U/104)= C标准管×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)×V总÷(V样÷V样总×500)÷T=0.015×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管) C标准管:标准管浓度,0.5μmol/mL;V总:酶促反应总体积,0.5mL;V样:加入样本体积,0.2mL ;V样总:加入提取液体积,1mL;T:反应时间,1/6小时;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本鲜重,g;500:细菌或细胞总数,500万。 注意事项: 1、由于每一个样都必须做对照,本试剂盒50管只能测 24份Ca++ Mg++-ATP酶。 2、此法具有微量、灵敏、快速的特点。所以对测定所用试管要求严格无磷。避免磷污染是检测成败的关键。 3、空白管和标准管只要做一管。
相关文献: 《Apigenin suppresses the apoptosis of H9C2 rat cardiomyocytes subjected to myocardial ischemia?reperfusion injury via upregulation of the PI3K/Akt pathway》 作者:Zhengwen Zhou, Yue Zhang, Luning Lin, Jianmei Zhou 期刊:Molecular Medicine Reports 影响因子:1.851 PMID:29901074 《Protein kinase C mediates juvenile hormone-dependent phosphorylation of Na+/K+-ATPase to induce ovarian follicular patency for yolk protein uptake》 作者:Yu-Pu Jing, Hongli An, Shanjing Zhang, Ningbo Wang, Shutang Zhou 期刊:Journal of Biological Chemistry 影响因子:4.106 PMID: Ca++Mg++ ——ATP酶活性检测试剂盒 |