产品名称:海藻糖含量检测试剂盒产品英文名: Micro Trehalose Content Assay Kit产品货号:BC0335 产地:北京市通州区马驹桥联东U谷8三楼产品规格:100管/96样 产品商标:solarbio 保存与运输:4℃保存或-20℃保存; 参考价格:840 库存状态:现货 关键字: 海藻糖检测试剂盒| | 海藻糖|试剂盒
简要介绍: 海藻糖存在于大量有机体中,包括细菌、藻类、酵母、植物、昆虫和其他无脊椎动物。由于海藻糖具有*的不同于其他碳水化合物的生物学特性,能在干旱、高温、脱水、冷冻、高渗透压及毒性物质等恶劣环境下保护生物体细胞蛋白质、脂肪、糖类、核酸等组分不受损害。
产品详细描述 产品内容: 提取液:液体100mL×1瓶,4℃保存; 试剂一:粉剂×1瓶,4℃保存; 标准品:粉剂×1支,含10mg海藻糖。 产品说明: 海藻糖存在于大量有机体中,包括细菌、藻类、酵母、植物、昆虫和其他无脊椎动物。由于海藻糖具有*的不同于其他碳水化合物的生物学特性,能在干旱、高温、脱水、冷冻、高渗透压及毒性物质等恶劣环境下保护生物体细胞蛋白质、脂肪、糖类、核酸等组分不受损害。 测定方法采用蒽酮比色法。具有灵敏度高﹑简便快捷﹑适用于微量样品的测定等优点。但是蒽酮比色法也存在一定缺陷,如果样本中含有可溶性糖,则会影响测定。本试剂盒建议用于除海藻糖外不含其他可溶性糖样本的测定。 需自备的仪器和用品: 可见分光光度计、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿﹑研钵、浓硫酸和蒸馏水。
操作步骤: 一、海藻糖提取: - 细菌或细胞处理:收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照每500万细菌或细胞加入1mL提取液,超声波破碎细菌或细胞(功率20%,超声3秒,间隔10秒,重复30次),室温静置45min,振荡3~5次,冷却后,8000g,常温离心,取上清。
- 组织的处理:称取约0.1g样本,常温研碎,加入1mL提取液,室温静置45min,振荡3~5次,冷却后,8000g,常温离心,取上清。
- 血清(浆)的处理:吸取约100μL血清(浆),加入0.9mL提取液,室温静置45min,振荡3~5次,冷却后,8000g,常温离心,取上清。
- 标准品的处理:标准品用1mL双蒸水溶解,溶液浓度为10mg/mL,稀释到0.1、0.08、0.06、0.04、0.02、0mg/mL。
二、测定操作表: - 分光光度计或酶标仪预热30min,波长调节620nm,蒸馏水调零。调节水浴锅95℃。
- 工作液的配制:临用前在每瓶试剂一中加入7mL蒸馏水后,缓慢加入28mL浓硫酸,不断搅拌,充分溶解,待用。用不完的试剂4℃保存一周。
- 标准曲线的建立:取60mL标准液和240mL现配的工作液混匀,95℃水浴10 min,(盖紧,防止水分散失)自然冷却室温,取200mL比色皿或酶标板中,在620nm处测吸光值A。根据标准样本的浓度(y)和吸光度(x)建立标准曲线。
- 样本测定:取60mL样本和240mL现配的工作液混匀,95℃水浴10 min,(盖紧,防止水分散失)自然冷却室温,取200mL比色皿或酶标板中,在620 nm 波长下测定吸光度值为A。
若吸光值大于1,请将样本用提取液适当稀释。后计算时乘以相应的稀释倍数。 三、海藻糖含量计算: 使用微量比色皿时,计算公式如下: 1、根据标准曲线计算样本中海藻糖的含量y(mg/mL)。 2、按样本鲜重计算: 海藻糖含量(mg/g 鲜重)= V1×y÷(W×V1÷V2)=y ÷W。 3、按样本蛋白浓度计算: 海藻糖含量(mg/mg prot)=V1×y÷(V1×Cpr)=y÷Cpr。 4、按细菌或细胞数量计算: 海藻糖含量(μg/104 cell)=1000 × V1 × y÷(500 × V1÷V2)=2× y 5、血清(浆)海藻糖含量计算 海藻糖含量(mg/mL)=V1×y÷(V3×V1÷V2)=10×y V1: 反应体系中样本体积,0.06mL;V2:提取液总体积,1mL;V3:血清、血浆体积,0.1mL;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL;W:样本质量,g;500:细胞或细菌总数,500万;1000:单位换算系数,1mg/mL=1000mg/mL。 注意:低检测限为10μg/g 鲜重或0.1μg/mg prot。
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