土壤中性蛋白酶活性检测试剂盒 微量法 土壤中性蛋白酶活性检测试剂盒说明书 微量法
产地:北京市通州区马驹桥联东U谷8三楼 英文名称:Soil neutral protease activity detection kit 产品商标:solarbio 注意:正式测定之前选择2-3 个预期差异大的样本做预测定。 货号:BC0275 规格:100T/48S 保存与运输:4℃保存或-20℃保存; 参考价格:1380 库存状态:现货 关键词:土壤中性蛋白酶|土壤中性蛋白酶活性检测|蛋白酶活性检测 产品内容: 试剂一:液体20mL×1 瓶,4℃保存; 试剂二:粉剂×1 瓶,4℃保存;临用前加入10mL试剂一,沸水浴搅拌溶解后待用; 试剂三:粉剂×1 瓶,4℃保存;临用前加入10mL 蒸馏水充分溶解待用; 试剂四:液体20mL×1 瓶,4℃保存; 试剂五:液体5mL×1 瓶,4℃保存; 标准品:液体1mL×1 支,0.2 μmol/mL 酪氨酸溶液,4℃保存。
产品说明: 土壤蛋白酶参与土壤中存在的氨基酸、蛋白质以及其他含蛋白质氮的有机化合物的转化,其水解产物是高等植物的氮源之一。土壤中性蛋白酶在中性环境下催化蛋白质水解,与土壤有机质含量、氮素及其他土壤性质有关。中性条件下,土壤中性蛋白酶可将酪蛋白水解产生酪氨酸;在碱性条件下,酪氨酸还原磷钼酸化合物生成钨蓝,在680nm 有特征吸收峰。
实验中所需仪器及设备: 可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、可调式移液枪、微量比色皿/96孔板、甲苯、蒸馏水、50目筛(或更小)。
样品处理: 新鲜土样自然风干或37℃烘箱风干,过30~50 目筛。
操作步驟: 1、分光光度计/酶标仪预热30min 以上,调节波长680nm,蒸馏水调零。 2、样本测定: 试剂名称 测定管 对照管 标准管 空白管 风干土样(g) 0.05 0.05 - - 试剂一(μL) 50 50 - - 试剂二(μL) 100 - - 混匀后,37℃反应24h,期间振荡5-6 次,使土样与反应液充分接触。 试剂三(μL) 100 100 - - 试剂二(μL) - 100 - - 混匀,10000rpm 室温离心10min,取上清液 上清液(μL) 44 44 - - 标准液(μL) - - 44 - 蒸馏水(μL) - - - 44 试剂四(μL) 130 130 130 130 试剂五(μL) 26 26 26 26
混匀,40℃水浴10min,10000rpm 室温离心10min,取上清液于680nm 下读取各管吸光值A,分别记为A 测定管、A 对照管、A 标准管、A 空白管,计算ΔA 测定=A 测定管-A 对照管,ΔA 标准=A 标准管-A 空白管。
注意:标准管、空白管只需测一次。每个测定管设一个对照管。
土壤中性蛋白酶活性计算: 单位定义:每天每g土样中产生1μmol 酪氨酸为一个土壤中性蛋白酶活力单位。土壤中性蛋白酶(U/g)=C标准×ΔA测定÷ΔA标准×V 反总÷W÷T= 0.05×ΔA测定÷ΔA标准÷W。 C 标准管:标准管浓度,0.2 μmol/mL; V 反总:反应体系总体积,0.25mL; T:反应时间,1d; W:样本质量,g。
注意事项: 1、当吸光值大于1.5时,建议将上清液稀释后进行测定,计算时注意乘以稀释倍数。 土壤中性蛋白酶活性检测试剂盒 微量法 |