羟脯氨酸(HYP)含量检测试剂盒 产品名称: 羟脯氨酸(HYP)含量检测试剂盒产品英文名: Hydroxyproline(HYP) Content Assay Kit产品货号:BC0250 产地:北京市通州区马驹桥联东U谷8三楼产品规格:50管/48样 产品商标:solarbio 保存与运输:4℃保存或-20℃保存; 参考价格:420 库存状态:现货 关键字: :羟脯氨酸检测试剂盒|HYP检测试剂盒|羟脯氨酸|试剂盒
简要介绍: HYP是机体胶原蛋白主要成分之一,胶原蛋白大多分布于皮肤、腱、软骨和血管等,因此HYP含量是反映胶原组织代谢及纤维化程度的一项重要指标。 样品经水解产生游离的HYP,进一补被氯胺T氧化,氧化产物与对二甲氨基ben甲醛反应,产生红色化合物,在560nm处有特征吸收峰。通过测定样品水解液560nm吸光值,可计算HYP含量。
产品详细描述 产品内容: 提取液:6mol/L盐酸,自备。浓盐酸:H2O(V/V)= 1:1,室温保存。 试剂一:液体15mL×1瓶,4℃避光保存。 试剂二:液体15mL×1瓶,4℃避光保存。 标准品:液体1mL×1支,0.5mg/mL 羟脯氨酸标准品,4℃保存。 产品说明: HYP是机体胶原蛋白主要成分之一,胶原蛋白大多分布于皮肤、腱、软骨和血管等,因此HYP含量是反映胶原组织代谢及纤维化程度的一项重要指标。 样品经酸水解产生游离的HYP,进一步被氯胺T氧化,氧化产物与对二甲氨基ben甲醛反应,产生红色化合物,在560nm处有特征吸收峰。通过测定样品水解液560nm吸光值,可计算HYP含量。 试验中所需的仪器和试剂: 天平、烘箱、玻璃管、离心机、水浴锅、可见分光光度计、1 mL玻璃比色皿、6mol/L盐酸和蒸馏水。 操作步骤: 一、羟脯氨酸提取 1. 组织:称取约0.5g样品于玻璃管,将组织尽量剪碎以便消化,盖子稍松不密闭。加入5mL的提取液,煮沸或110℃烘箱26小时消化没有可见大的团块,16000rpm,25℃,离心20min(若离心后仍有杂质,可通过过滤去除),用10mol/LNaOH(约3mL)调节pH值6~8范围内。蒸馏水定容8mL,取上清待测。(过程中可能有黑色物质生成,若长时间不能消化,可能为碳化的物质) 2. 细胞:取500万个细胞,加入1mL的提取液,煮沸或110℃烘箱26小时消化透明状,16000rpm,25℃,离心20min,用10mol/LNaOH(约0.5mL)调节pH值6~8范围内。蒸馏水定容2mL,取上清待测。 二、测定操作: - 将标准品稀释为15、7.5、3.75、1.875、0.938、0.469、0.234、0.117ug/mL的标准溶液。
- 按下表进行操作:
| 对照管 | 测定管 | 标准管 | 样本(μL) | | 200 | | 标准溶液(μL) | | | 200 | 试剂一(μL) | 200 | 200 | 200 | 混匀,室温静置20min | 试剂二(μL) | 200 | 200 | 200 | H2O(μL) | 600 | 400 | 400 | 混匀,60℃,20min,取出后室温静置15 min,用1mL比色皿,在560nm下分别测定对照管,测定管,标准管的OD值,并记为A对照管,A测定管,A标准管。 |
三、羟脯氨酸含量计算公式
- 标准曲线的绘制:
以标准溶液的浓度为x轴,∆A标准(∆A =A标准管-A对照管)为y轴,绘制标准曲线,得到方程y=kx+b。将∆A测定(∆A =A测定管-A对照管)带入方程得到x。 - 羟脯氨酸含量的测定:
(1)按样本鲜重计算: 组织羟脯氨酸含量(µg/g 鲜重)= x×V样品÷(W×V样品÷V组提)=8x÷W。 (2)按样本蛋白浓度计算: 组织羟脯氨酸含量(µg/mg prot)= x×V样品÷(Cpr×V样品)=x÷Cpr。 (3)按细菌或细胞密度计算: 细胞羟脯氨酸含量(µg/104 cell)= x×V样品÷(细胞数量×V样品÷V胞提)=2x÷细胞数量。 V样品:加入的样品体积,0.2mL;V组提:组织提取液体积,8mL;V胞提:细胞提取液体积,2mL;W:样本鲜重;细胞数量:以104计;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL。 注意事项: - OD值大于1,样品适当稀释再测定,注意计算公式里乘以稀释倍数。
- 试剂有一定的毒性,请操作时做好防护措施,防止吸入或与皮肤接触。
3、按样本蛋白浓度计算时,需单独提取样本中的蛋白质并测定。
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