抗坏血酸过氧化物酶(APX)活性检测试剂盒 产品名称:: 抗坏血酸过氧化物酶(APX)活性检测试剂盒 微量法产品英文名: Micro Ascorbate Peroxidase (APX) Assay Kit产品货号:BC0225 产地:北京市通州区马驹桥联东U谷8三楼产品规格:100管/96样 产品商标:solarbio 保存与运输:4℃保存或-20℃保存; 参考价格:1300 库存状态:现货 关键字: 抗坏血酸过氧化物酶检测试剂盒|APX检测试剂盒|抗坏血酸过氧化物酶|试剂盒
简要介绍: APX 是植物清除活性氧的重要抗氧化酶之一,也是抗坏血酸代谢的关键酶之一。APX具有多种同功酶,分别定位于叶绿体、胞质、线粒体、过氧化物和乙醛酸体,以及过氧化体和类囊体膜上。APX 催化H2O2 氧化AsA,是植物AsA的主要消耗者。APX 的活性直接影响到AsA 的含量,在胁迫和解胁迫条件下,APX 与AsA 具有一定的负相关性。 APX催化H2O2氧化AsA,通过测定AsA 的氧化速率,可计算得APX 活力。
产品详细描述 产品内容: 试剂一:液体60mL×2瓶,4℃保存。 试剂二:粉剂×1瓶,4℃保存。临用前加3 mL蒸馏水充分溶解。 试剂三:液体3mL×1瓶,4℃保存。 产品说明: APX 是植物清除活性氧的重要抗氧化酶之一,也是抗坏血酸代谢的关键酶之一。APX具有多种同功酶,分别定位于叶绿体、胞质、线粒体、过氧化物和乙醛酸体,以及过氧化体和类囊体膜上。APX 催化H2O2 氧化AsA,是植物AsA的主要消耗者。APX 的活性直接影响到AsA 的含量,在胁迫和解胁迫条件下,APX 与AsA 具有一定的负相关性。 APX催化H2O2氧化AsA,通过测定AsA 的氧化速率,可计算得APX 活力。 试验中所需的仪器和试剂: 低温离心机、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔UV板、移液枪、研钵、冰和蒸馏水。
操作步骤: 一、粗酶液提取 : 称取约0.1g样品,加1 mL试剂一,冰上充分研磨,13000g 4℃离心20min,取上清液。 二、测定操作表: 1. 分光光度计/酶标仪预热30 min以上,调节波长到265 nm,用蒸馏水调零。 2. 试剂一在25℃中预热30min以上。 3. 空白管:依次在微量石英比色皿/96孔板中加入20μL蒸馏水、140μL预热的试剂一、20μL试剂二和20μL试剂三,迅速混匀后在290nm测定10s和130s光吸收A1和A2,△A空白管=A1-A2。 4. 测定管:依次在微量石英比色皿/96孔板中加入20μL上清液、140μL预热的试剂一、20μL试剂二和20μL试剂三,迅速混匀后在290nm测定10s和130s光吸收A3和A4,△A测定管=A3-A4。 三、APX 活力计算: a.使用微量石英比色皿测定的计算公式如下 (1)按蛋白浓度计算 活性单位定义:每毫克蛋白每分钟氧化1μmol AsA 为1U。 APX(U/mg prot) = (△A测定管-△A空白管)÷(ε×d)×V反总×106÷(Cpr×V样)÷T =1.79×(△A测定管-△A空白管) ÷Cpr (2)按样本鲜重计算 活性单位定义:每克样品每分钟氧化1μmol AsA 为1U。 APX(U/g 鲜重) = (△A测定管-△A空白管)÷(ε×d)×V反总×106÷(V样÷V样总×W)÷T =1.79×(△A测定管-△A空白管) ÷W ε:AsA在290nm处摩尔吸光系数为2.8×103 L/mol/cm;d:比色皿光径(cm),1 cm;V反总:反应体系总体积(L),200μL=2×10-4 L;106:1mol=1×106μmol;Cpr:上清液蛋白质浓度(mg/mL),需要另外测定,建议使用本公司BCA蛋白质含量测定试剂盒;W :样品质量,g;V样:加入反应体系中上清液体积(mL),20μL=0.02mL;V样总:加入试剂一体积,1mL;T:催化反应时间(min),2min。 b.使用96孔板测定的计算公式如下 (1)按蛋白浓度计算 活性单位定义:每毫克蛋白每分钟氧化1μmol AsA 为1U。 APX(U/mg prot) = (△A测定管-△A空白管)÷(ε×d)×V反总×106÷(Cpr×V样)÷T =3×(△A测定管-△A空白管) ÷Cpr (2)按样本鲜重计算 活性单位定义:每克样品每分钟氧化1μmol AsA 为1U。 APX(U/g 鲜重) = (△A测定管-△A空白管)÷(ε×d)×V反总×106÷(V样÷V样总×W)÷T =3×(△A测定管-△A空白管) ÷W ε:AsA在290m处摩尔吸光系数为2.8×103 L/mol/cm;d:96孔板光径(cm),0.6 cm;V反总:反应体系总体积(L),200μL=2×10-4 L;106:1mol=1×106μmol;Cpr:上清液蛋白质浓度(mg/mL),需要另外测定,建议使用本公司BCA蛋白质含量测定试剂盒;W :样品质量,g;V样:加入反应体系中上清液体积(mL),20μL=0.02mL;V样总:加入试剂一体积,1mL;T:催化反应时间(min),2min。 |