过氧化氢酶(CAT)活性检测试剂盒 产品名称:过氧化氢酶测定试剂盒 产品英文名:Catalase (CAT) Assay Kit 产品货号:BC0200 产地:北京市通州区马驹桥联东U谷8三楼 产品规格:50管/48样 产品商标:solarbio 保存与运输:4℃保存或-20℃保存; 参考价格:130 库存状态:现货 关键字:过氧化氢酶试剂盒
简要介绍: CAT(EC 1.11.1.6)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,是主要的H2O2清除酶,在活性氧清除系统中具有重要作用。H2O2在240nm下有特征吸收峰,CAT能够分解H2O2,使反应溶液240nm下的吸光度随反应时间而下降,根据吸光度的变化率可计算出CAT活性。
产品详细描述 商品货号: | 商品品牌: | 规格 | 基本售价: | 选择规格 | BC0200-50管/48样 | Solarbio | 50管/48样 | 130.00元 | |
产品内容: 提取液:液体 60mL×1 瓶,4℃保存; 试剂一:液体 60mL×1 瓶,4℃保存; 试剂二:液体 100μL×3 瓶,4℃保存。
产品说明: CAT(EC1.11.1.6)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,是主要的 H2O2清除酶,在活 性氧清除系统中具有重要作用。 H2O2在 240nm 下有特征吸收峰,CAT 能够分解 H2O2,使反应溶液 240nm 下的吸光度随反应时 间而下降,根据吸光度的变化率可计算出 CAT 活性。
操作步骤: 一、粗酶液提取: 1、细菌、细胞或组织样品的制备 细菌或培养细胞:收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个): 提取液体积(ml)为 500-1000:1 的比例(建议 500 万细菌或细胞加入 1ml 提取液),超声波破碎细 菌或细胞(功率 20%或 200w,超声 3 秒,间隔 10 秒。重复 30 次);8000g4℃离心 10 分钟,取上 清,置冰上待测。 组织:按照组织质量(g):提取液体积(ml)为 1:5-10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加 入 1mL 提取液),进行冰浴匀浆。8000g4℃离心 10 分钟,取上清,置冰上待测。 2、血清(浆)样品:直接检测。 二、CAT 测定操作 1、 分光光度计预热 30min 以上,调节波长 240nm 处,蒸馏水调零。 2、 CAT 检测工作液的配置:用时在每瓶试剂二(100μL)中加入 20ml 试剂一,充分混匀,作为工 作液;用不完的试剂 4℃保存一周。 3、 测定前将 CAT 检测工作液 37℃(哺乳动物)或 25℃(其他物种)水浴 10min。 4、 取 1mLCAT 检测工作液于 1mL 石英比色皿中,再加入 35μL 样本,混匀 5s;室温下立即测定 240nm 下的初始吸光值 A1 和 1min 后的吸光值 A2。计算ΔA=A1-A2 三、CAT 活性计算: 1、 血清(浆)CAT 活力的计算: 单位的定义:每毫升血清(浆)在反应体系中每分钟催化 1nmolH2O2降解定义为一个酶活力单 位。CAT(U/mL)=﹝ΔA×V 反总÷(ε×d)×109﹞÷V 样÷T=678×ΔA 2、 组织、细菌或细胞中 CAT 活力计算: (1) 按样本蛋白浓度计算: 单位的定义:每 mg 组织蛋白在反应体系中每分钟催化 1nmolH2O2降解定义为一个酶活力单位。 CAT(U/mgprot)=﹝ΔA×V 反总÷(ε×d)×109﹞÷(V 样×Cpr)÷T=678×ΔA÷Cpr (2) 按样本鲜重计算: 单位的定义:每 g 组织在反应体系中每分钟催化 1nmolH2O2降解定义为一个酶活力单位。 CAT(U/g 鲜重)=﹝ΔA×V 反总÷(ε×d)×109﹞÷(W×V 样÷V 样总)÷T=678×ΔA÷W 3、 按细菌或细胞中 CAT 活力计算: 单位的定义:每 1 万个细菌或细胞在每分钟反应体系中每分钟催化 1nmolH2O2降解定义为一个 酶活力单位。 CAT(U/104 cell)=﹝ΔA×V 反总÷(ε×d)×109﹞÷(500×V 样÷V 样总)÷T=1.356×ΔA V 反总:反应体系总体积,1.035×10-3L;ε:H2O2摩尔吸光系数,4.36×104L/mol/cm;d:比色皿 光径,1cm;V 样:加入样本体积,0.035ml;V 样总:加入提取液体积,1ml;T:反应时间,1min。 W,样本质量,g;Cpr:上清液蛋白浓度,mg/ml;500:细胞或细菌总数,500 万。
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