硝酸还原酶(NR)活性检测试剂盒 产品英文名: Micro Nitrate Reductase(NR)Assay Kit产品货号:BC0085 产地:北京市通州区马驹桥联东U谷8三楼产品规格:100管/48样 产品商标:solarbio 保存与运输:4℃保存或-20℃保存; 参考价格:580 库存状态:现货 关键字: 硝酸还原酶检测试剂盒|NR检测试剂盒|硝酸还原酶|试剂盒
简要介绍: NR广泛存在于植物中,是植物硝态氮转化为氨态氮的关键酶,也是诱导酶,对作物的产量和品质有影响。 NR催化硝酸盐还原为亚硝酸盐,NO3ˉ+NADH+H+→NO2ˉ+NAD++H2O ;产生的亚硝酸盐能够在酸性条件下,与对氨基ben磺酸及α-萘胺定量生成红色偶氮化合物;生成的红色偶氮化合物在540 nm有大吸收峰,可用分光光度法测定。
产品详细描述 产品内容: 诱导剂储备液:液体100mL×1瓶,4℃保存。 提取液:液体60mL×1瓶,4℃保存。 试剂一:液体10mL×1瓶,-20℃保存。 试剂二:粉剂×1瓶,-20℃保存。临用前加入2mL提取液溶解,可分装后-20℃保存,避免反复冻融。 试剂三:液体2mL×1瓶,4℃保存。 试剂四:粉剂×1瓶,-20℃保存。临用前加入5mL蒸馏水溶解,可分装后-20℃保存,避免反复冻融。 试剂五:液体8mL×1瓶,4℃保存。(如出现结晶析出,60 ℃水浴溶解后使用) 试剂六:液体8mL×1瓶,4℃保存。 标准品:NaNO2标准储备液1mL,10μmol/mL,-20℃保存。临用前用蒸馏水稀释0.2μmol/mL。 诱导剂应用液的配制:用时将诱导剂储备液用水稀释10倍,即取10mL诱导剂储备液加90mL蒸馏水,充分混匀。 产品说明: NR( EC 1.7.1.3)广泛存在于植物中,是植物硝态氮转化为氨态氮的关键酶,也是诱导酶,对作物的产量和品质有影响。 NR催化硝酸盐还原为亚硝酸盐,NO3ˉ+NADH+H+→ NO2ˉ +NAD++H2O;产生的亚硝酸盐能够在酸性条件下,与对–氨基ben磺酸α-萘胺定量生成红色偶氮化合物;生成的红色偶氮化合物在540 nm有大吸收峰,可用分光光度法测定。 需自备的仪器和用品: 可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。 操作步骤: 一、样品测定的前处理 1、取适量诱导剂于烧杯中,将新鲜标本洗净,滤纸吸干,放入诱导剂应用液中(淹没即可),浸泡2h,取出样本,滤纸吸干后,-20℃冷冻30min,取出样本,滤纸吸干。(根据需要进行诱导处理) 2、称取约0.1g样本,加入1mL提取液,冰浴研磨,4000g,4℃离心10min,取上清置冰上待测。 二、测定步骤 1、分光光度计预热30min以上,调节波长540nm,蒸馏水调零。 2、样本测定(在EP管中加入下列试剂) 试剂名称(μL) | 加样孔 | 测定管 | 对照管 | 标准管 | 空白管 | 样本 | 50 | 50 | - | - | 标准溶液 | - | - | 50 | - | 双蒸水 | - | - | - | 50 | 试剂一 | 180 | 180 | 180 | 180 | 试剂二 | 20 | - | 20 | 20 | 混匀后,37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)水浴30min | 试剂三 | 20 | 20 | 20 | 20 | 试剂二 | - | 20 | - | - | 4000g 常温离心10min,取上清液。 | 上清液 | 80 | 80 | 80 | 80 | 试剂四 | 20 | 20 | 20 | 20 | 试剂五 | 50 | 50 | 50 | 50 | 试剂六 | 50 | 50 | 50 | 50 |
混匀,显色20min,520nm下比色,分别记为A测定、A对照、A标准、A空白。计算ΔA=A测定-A对照,ΔA标准=A标准-A空白 注意:空白管只需测一次。 三、NR活性计算: (1)按样本鲜重计算: 单位定义:每小时每g鲜重样品中催化产生 1μmol NO2ˉ的量为一个 NR活力单位。 NR(U/g 鲜重)=ΔA÷(ΔA标准÷C标准)×V提取÷W÷T =0.4×ΔA÷ΔA标准÷W。 (2)按样本蛋白浓度计算: 单位定义:每小时每mg组织蛋白催化产生 1μmol NO2ˉ的量为一个 NR活力单位。 NR(U/mg prot)==ΔA÷(ΔA标准÷C标准)×V样品÷(V样品×Cpr)÷T=0.4×ΔA÷ΔA标准÷Cpr。 V样品:吸取样本体积,0.05mL;V提取:加入提取液体积,1mL;T:反应时间,0.5h;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本鲜重,g;C标准:标准液浓度,0.2μmol/mL。 注意事项: 1、当测定的吸光值大于1.2或者ΔA大于0.8时,建议将上清液稀释后测定。 2、ΔA测定过小(小于0.01),可延长反应时间(水浴时间)。
相关文献: 《FIP1 Plays an Important Role in Nitrate Signaling and Regulates CIPK8 and CIPK23 Expression in Arabidopsis》 作者:Chao Wang, Wenjing Zhang, Zehui Li, Zhen Li, Yingjun Bi, Nigel M. Crawford and Yong Wang 期刊:Frontier in Immunology 影响因子:4.716 PMID: 《Knockout of SlSBPASE Suppresses Carbon Assimilation and Alters Nitrogen Metabolism in Tomato Plants》 作者:Fei Ding, Qiannan Hu, Meiling Wang and Shuoxin Zhang 期刊:International Journal of Molecular Sciences 影响因子:4.183 PMID:30558146 《The trehalose-6-phosphate synthase TPS5 negatively regulates ABA signaling in Arabidopsis thaliana》 作者:Lianfu Tian,Zijing Xie,Changqing Lu,Xiaohua Hao,Sha Wu,Yuan Huang,Dongping Li,Liangbi Chen 期刊:Plant Cell Rep. 影响因子:3.499 PMID:30963238 硝酸还原酶(NR)活性检测试剂盒 |