TriQuick 总RNA 提取试剂 (TriQuick Reagent ) 货号 : R1100 规格 : 100ml 保存 : 4℃避光保存,保质期 12 个月。 产品简介 : 本试剂是一种通用的总 RNA 提取试剂, 适用于动植物细胞或组织及细菌的总 RNA 抽提, 可有效防止 RNA在提取过程中的降解。 获得的 RNA 可直接用于 Northern 杂交, 纯化 mRNA, 体外翻译, RNase 保护实验, RT-PCR以及 cDNA 克隆等一系列操作。该试剂可用于 100 次总 RNA 提取(10 平方厘米细胞或 100mg 组织)。
1. 细胞裂解或组织匀浆 : 1)贴壁细胞:吸尽培养液,每 10 平方厘米(6 孔板孔或 35 mm 平皿)细胞加入 1 ml TriQuick Reagent,使其覆盖培养细胞,再用吸管或加样器吹打 2~3 次,细胞应*裂解,然后转移离心管中。 2)悬浮细胞: 离心收集细胞, 吸尽液体, 每五百万一千万 (5×10 6 -1×10 7 ) 动植物或酵母细胞, 或一千万 (1×10 7 )细菌,加入 1ml TriQuick Reagent 。用吸管或加样器吹打,使其*裂解。某些酵母和细菌如裂解不充分,可用匀浆器匀浆,以确保其*裂解。转移离心管中。 3)组织:先将组织剪切成小块,放入玻璃匀浆器内。冷冻组织可在研钵中研磨匀浆。每 50-100mg 组织加入 1mlTriQuick Reagent ,匀浆*裂解。转移离心管中。 裂解产物应呈澄清的透明粘稠液体。室温放置 5 分钟。对于多糖、蛋白等杂质丰富的组织样品,匀浆后仍会存留有不溶物质,可 12000g 4℃离心 10 分钟,然后吸取上清一新的离心管中。 2. 分离 :在装有裂解物的离心管中加入 0.2 倍体积的**(1 ml TriQuick Reagent 加入 0.2 ml **),振荡器上充分振荡混匀 30 秒,室温放置 2-3 分钟。12000g 4℃离心 10 分钟,然后吸取含总 RNA 的上层水相一新的离心管中,每毫升 TriQuick Reagent 约可吸取 0.5-0.6 ml。有机相和中间层含有 DNA 和蛋白质,应避免触及。 3. 沉淀 :按每毫升 TriQuick Reagent 加入 0.5 ml 异丙醇,颠倒数次混匀,室温沉淀 10 分钟。12000g 4℃离心 10 分钟,在管底可见 RNA 沉淀。弃上清,按每毫升 TriQuick Reagent 加入 1 ml 75%乙醇,轻轻颠倒混匀,以清洗 RNA 沉淀。12000g 4℃离心 2 分钟,弃去液体,小心勿丢弃 RNA 沉淀。室温倒置晾干 5~10 分钟。 4. 溶解 :加入适量 DEPC 处理水使 RNA 沉淀溶解。存放于-80℃。
注意事项 : 1,RNA 提取过程中所用器皿、离心管、吸头等应保证无污染无 RNA 酶。操作中应小心,防止外源性 RNA 酶污染样品导致 RNA 样品降解。 2,试剂中含有酚等有害物质,注意个人防护。
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