β-1,3葡聚糖酶（β-1,3-GA）检测试剂盒

操作步骤：

一、粗酶液提取：称取约 0.2g 组织，剪碎，放入预冷的研钵中，加入 1.0 mL 提取液进行冰浴匀浆，12000g，4℃，离心 10min，取上清，置冰上待测。

二、测定步骤

1、分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长 540nm，蒸馏水调零。

2、样本测定，（在 1.5mL EP 管中依次加入下列试剂）：试剂名称（μL） 测定管 对照管 标准管样本或标准液 35 35 35 双蒸水 35 35 试剂一 35 充分混匀，放入 37℃水浴 60 min 试剂二 230 230 230取 200μL 微量石英比色皿或 96 孔板中， 540nm 处记录各管吸光值 A，如果吸光值大于 2，可以用蒸馏水稀释后测定，ΔA=A 测定-A 对照。

β-1,3葡聚糖酶（β-1,3-GA）检测试剂盒

β-1,3-GA 活性计算：根据标准管吸光度（x）和浓度（y，mg/ml）建立标准曲线，将ΔA 带入公式中计算出样品中产生的还原糖的含量 y 值（mg/ml）（1） 按蛋白浓度计算单位的定义：每 mg 组织蛋白每小时产生 1mg 还原糖定义为一个酶活性单位。 β-1,3-GA(U/mg prot)=(y×V1)÷(V1×Cpr)=y ÷Cpr （2） 按样本鲜重计算单位的定义：每 g 组织每小时产生 1mg 还原糖定义为一个酶活性单位。 β-1,3-GA(U /g 鲜重)=(y×V1)÷(W×V1÷V2)=y ÷W (3) 按细菌或细胞密度计算单位的定义：每 1 万个细胞或细菌每小时产生 1mg 还原糖定义为一个酶活性单位。 β-1,3-GA(U /g 鲜重)=( y×V1)÷(500×V1÷V2)=0.002×y V1：加入反应体系中样本体积，0.035mL；V2：加入提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白质浓度， mg/mL；W：样本鲜重，g。

提取液：液体 100mL×1 瓶，4℃保存；试剂一：粉剂×1 瓶，4℃保存；临用前每瓶加入 3.5mL 双蒸水，充分溶解待用；试剂二：液体 30mL×1 瓶，4℃保存；标准品：粉剂×1 支，4℃保存，含 10mg 无水葡萄糖（干燥失重<0.2%），临用前加入 1ml 蒸馏水溶解，配制成 10mg/ml 葡萄糖溶液备用，4℃可保存 1 周，或者用饱和苯甲酸溶液溶解，可保存更长时间。标准品准备：将标准品用蒸馏水稀释 1、0.8、0.6、0.4、0.2mg/ml。

相关文献：

《The antifungal activity of a thaumatin-like protein from oyster Crassostrea gigas》 作者:X Niu,Q Xu,W Wang,Z Yu,Z Liu,C Qu,Y Liu,C Gong,L Wang,L Song 期刊:Invertebrate Survival Journal 影响因子:0.967 PMID: