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产品名称:线粒体柠檬酸含量测试定试剂盒 微量法

产品型号:BC2175

产品报价:

产品特点:线粒体柠檬酸含量测试定试剂盒 微量法
品牌:Solarbio | 货号:BC2175
检测方法 : 微量法
规格:100管/96样

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BC2175线粒体柠檬酸含量测试定试剂盒 微量法的详细资料:

        线粒体柠檬酸含量测试定试剂盒 微量法

测定意义:CA是线粒体三羧酸循环的*个中间产物,由柠檬酸合酶催化乙酰CoA与草酰乙酸合成,其含量是三羧酸循环强度的主要指标之一。

测定原理:CA在柠檬酸裂解酶的作用下,生成α-酮酸(草酰乙酸);在弱酸性条件下,α-酮酸进一步与苯肼反应,生成相应的α-酮酸苯腙;α-酮酸苯腙在330nm处有吸收峰,该波长下吸光度的变化程度可反映出CA的含量。

需要的仪器,耗材:可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、可调式移液枪、微量石英比色皿/96孔板、研钵、蒸馏水。 

          线粒体柠檬酸含量测试定试剂盒 微量法

试剂组成和配制:酸性提取液:液体 100mL×1 瓶,4℃保存。碱性提取液:液体 100mL×1 瓶,4℃保存。试剂一:液体 6mL×1 瓶,4℃保存。试剂二:液体 2mL×1 瓶,4℃保存。试剂三:粉剂×1 瓶,4℃保存;临用前加入 6mL 蒸馏水充分溶解待用;用不完的试剂 4℃保存;标准液:液体 1mL×1 支,10μmol/mL 柠檬酸标准液,4℃保存。

      

线粒体中柠檬酸提取:称 0.05~0.1g 样品(建议称 0.1g 样本),加入 0.5mL 酸性提取液,冰上充分研磨,600g/min 4℃ 离心 5min;取上清另一 EP 管中,11000g/min 4℃离心 10min,弃上清(取 300μL 该上清液和 300μL 碱性提取液中和后可用于细胞质 CA 含量测定);沉淀即线粒体,向沉淀中加入 0.5mL 酸性提取液,充分悬浮溶解,超声波破碎(功率 20%,超声 3 秒,间隔 10 秒,重复 30 次),取此溶液 300μL 和 300μL 碱性提取液中和,混匀,置冰上待测(不可用于蛋白质含量测定)。测定步骤: 1、分光光度计或酶标仪预热 30 min 以上,调节波长到 330nm,蒸馏水调零。 2、试剂一、二和三 37℃预热 10min。 3、样本测定:空白管和标准管只需要各做一个。试剂名称(μL) 空白管 标准管 测定管试剂一 60 60 60 蒸馏水 60 标准液 60 样本 60 试剂二 20 20 20 试剂三 60 60 60 充分混匀,330nm 立即测定初始吸光值 A1 和 37℃孵育 30min 后的吸光值 A2,ΔA=A2 –A1。柠檬酸含量计算:(1)按蛋白浓度计算柠檬酸含量(μmol/mg prot)=[C 标准管×(ΔA 测定管-ΔA 空白管)÷(ΔA 标准管-ΔA 空白管) ×V 样]÷(V 样÷Cpr)=10×(ΔA 测定管-ΔA 空白管)÷(ΔA 标准管-ΔA 空白管)÷Cpr 蛋白质含量需要另外测定。(2)按样本鲜重计算柠檬酸含量(μ mol/g鲜重)=[C标准管×(ΔA测定管-ΔA空白管)÷(ΔA标准管-ΔA空白管) ×V 样]÷(W×V 样÷V 样总)=10×(ΔA 测定管-ΔA 空白管)÷(ΔA 标准管-ΔA 空白管)÷W C 标准管:标准液浓度,10μmol/mL; V 样:加入反应体系中样本体积:0.06mL;V 样总:加入提取液体积:1mL;Cpr:样品蛋白浓度,mg/mL;W:样本质量,g。注意:检测限为 10nmol/mg prot 或 1μmol/g 鲜重。

 相关文献:

《Intracellular citrate accumulation by oxidized ATM-mediated metabolism reprogramming via PFKP and CS enhances hypoxic breast cancer cell invasion and metastasis》 作者:Meixi Peng, Dan Yang, Yixuan Hou, Shuiqing Liu, Maojia Zhao, Yilu Qin, Rui Chen, Yong Teng & Manran Liu 期刊:Cell Death and Disease 影响因子:5.959 PMID:30850587
 

 

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