淀粉分支酶（SBE）测定试剂盒 微量法

测定意义：SBE（EC 2.4.1.18）主要存在于植物中，是参与支链淀粉合成的关键酶，测定SBE活性在淀粉生物合成、农作物品种选育和品质遗传改良研究中具有重要意义

测定原理：淀粉和碘结合后在660nm有特征光吸收，SBE可切断支链淀粉侧支，从而降低了淀粉-碘复合物在660nm吸收值，一定时间内吸光度下降的百分率可以反映SBE活性。

需要的仪器，耗材:可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰、蒸馏水。

 淀粉分支酶（SBE）测定试剂盒 微量法

一、粗酶液提取按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液），进行冰浴匀浆。15000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。二、测定步骤试剂名称（μL） 对照管 测定管 95℃水浴 1min 后灭活的粗酶液 250 粗酶液 250 试剂一 320 320 试剂二 30 30 混匀，37℃准确保温 20 min，95℃水浴 1 min（盖紧防止水分散失），冷却试剂三 500 500 试剂四 40 40 混匀，室温静置 10min，用蒸馏水调零，660nm 处读取各管吸光值。，注意： 1、 可以在不同对照管中加入不同样品的粗酶液，然后集中进行 1min95℃水浴处理。 2、 试剂一如有沉淀，加入之前要使之充分溶解混匀。

1、按照蛋白浓度计算单位的定义：以波长 660nm 的吸光度下降百分率表示，每 mg 蛋白在反应体系中每降低 1％碘蓝值为一个酶活性单位。 SBE 活性(U/mg prot)=( A 对照管-A 测定管)/A 对照管÷Cpr ×100 2、按照样本鲜重计算单位的定义：以波长 660nm 的吸光度下降百分率表示，每 g 组织在反应体系中每降低 1％碘蓝值为一个酶活性单位。 SBE 活性(U/g 鲜重)=(A 对照管-A 测定管)/A 对照管÷(W÷V 样总)×100 V 样总：提取液总体积，1mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样品质量，g；T：反应时间，5min。

相关文献：

《ARSENATE INDUCED CHLOROSIS 1/ TRANSLOCON AT THE OUTER ENVOLOPE MEMBRANE OF CHLOROPLASTS 132 Protects Chloroplasts from Arsenic Toxicity 》 作者:Peitong Wang, Xi Chen, Xuan Xu, Chenni Lu, Wei Zhang, Fang-Jie Zhao 期刊:Plant physiology 影响因子:6.305 PMID: