纤维素酶（CL）测定试剂盒  微量法

操作步骤：

一、样品测定的准备：

1、细菌或细胞：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照每 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液，超声冰浴破碎细菌或细胞（功率 20％，超声 3S 秒，间隔 10S，重复 30 次）；8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

2、组织：称取约 0.1g 组织加入 1mL 提取液，冰浴中匀浆。8000g ，4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

二、加样表和测定步骤：试剂名称（μL） 对照管 测定管 标准管试剂一 50 50 - 试剂二 200 200 - 双蒸水 50 50 - 样本 50 - 煮沸的样本 50 - 混匀，40℃准确水浴 30min，取出后立即放入沸水中煮沸 15min,得糖化液 混匀，540nm 处蒸馏水调零，测定吸光值 A，样品管计算ΔA=A 测定管-A 对照管。标准曲线的建立：540nm 处蒸馏水调零，读标准管吸光值 A。以浓度（y）为纵坐标，吸光度 A（x）为横坐标建立标准曲线。

纤维素酶（CL）测定试剂盒  微量法

CL 活力计算：根据标准曲线，将ΔA 带入公式中（x）计算样品浓度 y（mg/mL）。 1、按照蛋白浓度计算单位的定义：每 mg 组织蛋白在反应体系中每分钟催化产生 1μg 葡萄糖定义为一个酶活力单位。 CL 活力（U /mg prot）＝1000×y×V 反总÷（V 样×Cpr）÷T=233×y÷Cpr 2、按样本鲜重计算单位的定义：每 g 组织在反应体系中每分钟催化产生 1μg 葡萄糖定义为一个酶活力单位。 CL 活力（U/g 鲜重）＝1000×y×V 反总÷（W×V 样÷V 样总）÷T =233×y÷W 3、按细菌或细胞密度计算单位的定义：每1万个细菌或细胞在反应体系中每分钟催化产生1μg 葡萄糖定义为一个酶活力单位。 CL 活力（U/10 4 cell）＝1000×y×V 反总÷（500×V 样÷V 样总）÷T =0.467×y 1000：1mg/mL=1000ug/mL；V 反总：反应体系总体积，0.35mL； V 样：加入样本体积， 0.05 mL；V 样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，30 min；Cpr：样本蛋白质浓度， mg/mL；W：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500 万。

纤维素酶（CL）测定试剂盒  微量法

提取液：液体 50mL×1 瓶，4℃保存；试剂一：液体 4mL×1 瓶，4℃保存；试剂二：液体 10mL×1 瓶，4℃保存；试剂三：液体 13mL×1 瓶，4℃保存；标准品：粉剂×1 支，4℃保存，含 10mg 无水葡萄糖（干燥失重<0.2%），临用前加入 1ml 蒸馏水溶解，配制成 10mg/ml 葡萄糖溶液备用，4℃可保存 1 周，或者用饱和苯甲酸溶液溶解，可保存更长时间。