线粒体呼吸链复合体Ⅱ活性测定试剂盒

产品内容：

提取液：80mL×2 瓶，4℃保存； 试剂一：液体 40mL×1 瓶，4℃保存； 试剂二：粉剂×1 支，-20℃保存；溶于 1mL 丙酮，可分装后-20℃保存。临用前再用丙酮 100 倍 稀释后使用。 试剂三：粉剂×1 支，-20℃保存；临用前加入 2mL 丙酮溶解备用。 试剂四：液体 2.5mL×1 瓶，4℃保存；

产品说明： 线粒体复合体Ⅱ又称琥珀酸-辅酶 Q 还原酶，广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞的线 粒体中，催化琥珀酸氧化生成延胡索酸，同时辅基 FAD 还原为 FADH2，后者进一步还原氧化型辅 酶 Q 生成还原型辅酶 Q，是呼吸电子传递链的支路。 复合体Ⅱ的催化产物还原型辅酶 Q 可进一步还原 2,6-二氯吲哚酚，2,6-二氯吲哚酚在 605nm 有 特征吸收峰，通过检测 2,6-二氯吲哚酚的少速率来计算该酶活性。

试验中所需的仪器和试剂： 可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微玻璃比色皿/96 孔板、丙 酮、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

操作步骤：

一、复合体Ⅱ的提取：

(1) 称取约 0.1g 组织或收集 500 万细胞，加入 1.0 mL 提取液，用匀浆器或研钵于冰上匀浆。

(2) 4 ℃ 600 g 离心 10min。

(3) 将上清液移另一离心管中，4 ℃ 11000 g 离心 15min。

(4) 上清液即胞浆提取物，可用于测定从线粒体泄漏的复合体Ⅱ（此步可选做，可以判断线粒体提 取效果）。

(5) 在沉淀中加入 400uL 提取液，超声波破碎（功率 20％，超声 5 秒，间隔 10 秒，重复 15 次）， 用于复合体Ⅱ酶活性测定，并且用于蛋白含测定。

相关文献：

《A Damaged Oxidative Phosphorylation Mechanism Is Involved in the Antifungal Activity of Citral against Penicillium digitatum》 作者:Qiuli OuYang, Nengguo Tao* and Miaoling Zhang 期刊:Frontier in Immunology 影响因子:4.259 PMID:29503638

线粒体呼吸链复合体Ⅱ活性测定试剂盒