产品名称:海藻糖含量检测试剂盒

产品英文名: Micro Trehalose Content Assay Kit

产品货号：BC0335        产地：北京市通州区马驹桥联东U谷8三楼

产品规格：100管/96样        产品商标：solarbio
保存与运输：4℃保存或-20℃保存；            参考价格：840
库存状态：现货                          
关键字:    海藻糖检测试剂盒| | 海藻糖|试剂盒

简要介绍：
海藻糖存在于大量有机体中，包括细菌、藻类、酵母、植物、昆虫和其他无脊椎动物。由于海藻糖具有*的不同于其他碳水化合物的生物学特性，能在干旱、高温、脱水、冷冻、高渗透压及毒性物质等恶劣环境下保护生物体细胞蛋白质、脂肪、糖类、核酸等组分不受损害。

产品详细描述
产品内容：
提取液：液体100mL×1瓶，4℃保存；
试剂一：粉剂×1瓶，4℃保存；
标准品：粉剂×1支，含10mg海藻糖。
产品说明：
海藻糖存在于大量有机体中，包括细菌、藻类、酵母、植物、昆虫和其他无脊椎动物。由于海藻糖具有*的不同于其他碳水化合物的生物学特性，能在干旱、高温、脱水、冷冻、高渗透压及毒性物质等恶劣环境下保护生物体细胞蛋白质、脂肪、糖类、核酸等组分不受损害。
测定方法采用蒽酮比色法。具有灵敏度高﹑简便快捷﹑适用于微量样品的测定等优点。但是蒽酮比色法也存在一定缺陷，如果样本中含有可溶性糖，则会影响测定。本试剂盒建议用于除海藻糖外不含其他可溶性糖样本的测定。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿﹑研钵、浓硫酸和蒸馏水。

操作步骤：
一、海藻糖提取：   

1. 细菌或细胞处理：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照每500万细菌或细胞加入1mL提取液，超声波破碎细菌或细胞（功率20％，超声3秒，间隔10秒，重复30次），室温静置45min，振荡3~5次，冷却后，8000g，常温离心，取上清。
2. 组织的处理：称取约0.1g样本，常温研碎，加入1mL提取液，室温静置45min，振荡3~5次，冷却后，8000g，常温离心，取上清。
3. 血清（浆）的处理：吸取约100μL血清（浆），加入0.9mL提取液，室温静置45min，振荡3~5次，冷却后，8000g，常温离心，取上清。
4. 标准品的处理：标准品用1mL双蒸水溶解，溶液浓度为10mg/mL，稀释到0.1、0.08、0.06、0.04、0.02、0mg/mL。

二、测定操作表：

1. 分光光度计或酶标仪预热30min，波长调节620nm，蒸馏水调零。调节水浴锅95℃。
2. 工作液的配制：临用前在每瓶试剂一中加入7mL蒸馏水后，缓慢加入28mL浓硫酸，不断搅拌，充分溶解，待用。用不完的试剂4℃保存一周。
3. 标准曲线的建立：取60mL标准液和240mL现配的工作液混匀，95℃水浴10 min，（盖紧，防止水分散失）自然冷却室温，取200mL比色皿或酶标板中，在620nm处测吸光值A。根据标准样本的浓度（y）和吸光度（x）建立标准曲线。
4. 样本测定：取60mL样本和240mL现配的工作液混匀，95℃水浴10 min，（盖紧，防止水分散失）自然冷却室温，取200mL比色皿或酶标板中，在620 nm 波长下测定吸光度值为A。

若吸光值大于1，请将样本用提取液适当稀释。后计算时乘以相应的稀释倍数。 
三、海藻糖含量计算：
使用微量比色皿时，计算公式如下：
1、根据标准曲线计算样本中海藻糖的含量y（mg/mL）。
2、按样本鲜重计算：
海藻糖含量(mg/g 鲜重)= V1×y÷(W×V1÷V2)=y ÷W。
3、按样本蛋白浓度计算：
海藻糖含量(mg/mg prot)=V1×y÷(V1×Cpr)=y÷Cpr。
4、按细菌或细胞数量计算：
海藻糖含量(μg/10⁴ cell)=1000 × V1 × y÷(500 × V1÷V2)=2× y
5、血清（浆）海藻糖含量计算
海藻糖含量（mg/mL）＝V1×y÷(V3×V1÷V2)=10×y
V1: 反应体系中样本体积，0.06mL；V2：提取液总体积，1mL；V3：血清、血浆体积，0.1mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细胞或细菌总数，500万；1000:单位换算系数，1mg/mL=1000mg/mL。
 注意：低检测限为10μg/g 鲜重或0.1μg/mg prot。

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