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产品名称:CCK-8细胞增殖及毒性检测试剂盒

产品型号:CA1210

产品报价:

产品特点:细胞培养试剂CCK-8细胞增殖及毒性检测试剂盒
货号:CA1210
规格:100T/500T
保存 :4℃密封避光保存,有效期一年。
广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。可用于药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏等试验。

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CA1210CCK-8细胞增殖及毒性检测试剂盒的详细资料:

目录号 产品名称 规格 包装
CA1210-100  Cell Counting Kit-8  100 T 1ml
CA1210-500 Cell Counting Kit-8  500 T 5ml
CA1210-1000  Cell Counting Kit-8  1000 T  10ml
CA1210-3000  Cell Counting Kit-8  3000 T  30ml

保存 :4℃密封避光保存,有效期一年。


产品简介 :
    Cell Counting Kit-8 简称 CCK-8 试剂盒,为 MTT 法的替代方法,是一种基于 WST(水溶性四唑盐,化学名: 2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐) 的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。可用于药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏等试验


使用说明 :
一 、 制作标准曲线 ( 测定细胞具体数量时)
    1、先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量,然后接种细胞。
    2、按比例依次用培养基等比稀释成一个细胞浓度梯度,一般要做 3-5 个细胞浓度梯度,每组 3-6 个复孔。
    3、接种后培养细胞贴壁,然后加试剂培养一定时间后测定 OD 值,制作出一条以细胞数量为横坐标(X 轴) ,OD 值为纵坐标(Y 轴)的标准曲线。根据此标准曲线可以测定出未知样品的细胞数量(试用此标准曲线的前提是实验的条件要*,便于确定细胞的接种数量以及加入后的培养时间。 )
二 、 细胞活性检测
    1、在 96 孔板中接种细胞悬液(100µL/孔) 。将培养板放在培养箱中预培养(在 37℃,5% CO 2 的条件下) 。
    2、向每孔加入 10µL溶液(注意不要在孔中生成气泡,它们会影响 OD 值的读数) 。
    3、将培养板在培养箱内孵育 1-4 小时。
    4、用酶标仪测定在 450nm 处的吸光度。
    5、如果暂时不测定 OD 值,打算以后测定的话,可以向每孔中加入 10µL 0.1M 的 HCl 或者 1%SDS(W/V)溶液,并遮盖培养板避光保存在室温条件下。在 24 小时内吸光度不会发生变化。
三 、 细胞增值- 毒性检测
    1、 在 96 孔板中配置 100 µL 的细胞悬液。 将培养板在培养箱预培养 24 小时 (在 37 ℃, 5% CO2 的条件下) 。
    2、 向培养板加入 10µL 不同浓度的待测物质。 在培养箱孵育一段适当的时间 (例如: 6、 12、 24 或 48 小时) 。
    3、向每孔加入 10 µL溶液(注意不要在孔中生成气泡,它们会影响 OD 值的读数) 。如果待测物质有氧化性或还原性的话,可在加之前更换新鲜培养基(除去培养基,并用培养基洗涤细胞两次,然后加入新的培养基) ,去掉药物影响。
    4、将培养板在培养箱内孵育 1-4 小时。
    5、用酶标仪测定在 450 nm 处的吸光度。
    6、如果暂时不测定 OD 值,打算以后测定的话,可以向每孔中加入 10µL 0.1M 的 HCl 或者 1%SDS(W/V)溶液,并遮盖培养板避光保存在室温条件下。在 24 小时内吸光度不会发生变化。


活力计算:.
    细胞活力(%)=[A(加药)-A(空白)]/[ A(0 加药)-A(空白)]×100
    A(加药) :具有细胞溶液和药物溶液的孔的吸光度
    A(空白) :具有培养基和溶液而没有细胞的孔的吸光度
    A(0 加药) :具有细胞、溶液而没有药物溶液的孔的吸光度
    细胞活力:细胞增殖活力或细胞毒性活力


注意事项 :
    ①建议先做几个孔摸索接种细胞的数量和加入试剂后的培养时间。
    ②白细胞可能需要培养较长时间。
    ③当使用标准 96 孔板时,贴壁细胞的小接种量少为 1 ,000 个/孔 (100 µL 培养基)。检测白细胞时的灵敏度相对较低,因此推荐接种量不低于 2,500 个/孔 ( 100 µL 培养基)。如果要使用 24 孔板或 6 孔板实验,请先计算每孔相应的接种量,并按照每孔培养基总体积的 10% 加入溶液。
    ④如果没有 450nm 的滤光片,可以使用吸光度在 430-490 nm 之间的滤光片,但是 450nm 检测灵敏度高。
    ⑤培养基中酚红的吸光度可以在计算时,通过扣除空白孔中本底的吸光度而消去,因此不会对检测造成影响。

CC-8法与其它检测法之间的比较

细胞计数方法  MTT 法   XTT 法  WST-1 法 CC法
形 成 的
formazan 的 水
溶性
差 
产品性状 粉末  2 瓶溶液  溶液  1 瓶溶液
使用方法  配成溶液后使用 现配现用 无需预制 无需预制
检测灵敏度  很高 很高 高  
检测时间  较长  较短 较短
检测波长 560-600nm  420-480nm 420-480nm  430-490nm
细胞毒性  高,细胞形态*消失 很低,细胞形态不变 很低,细胞形态不变 很低,细胞形态不变
试剂稳定性 一般 较差  一般   
大批量样品检测  可以 非常适合 非常适合 非常适合
便捷程度 一般  便捷  便捷  非常便捷

 

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