产品简介

CCK-8试剂盒，为MTT法的替代方法，是一种基于WST的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。索莱宝提供国产CCK8试剂盒出售。 CCK-8试剂盒(细胞增殖及毒性检测试剂盒)

CCK-8试剂盒（Cell Counting Kit-8）是一种基于WST-8的快速、高灵敏度细胞活性检测的试剂盒，广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的检测。WST-8是一种类似于MTT的化合物，在电子耦合试剂存在的情况下，可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成橙黄色的水溶性甲臜化合物。细胞增殖越多越快，则颜色越深；细胞毒性越大，则颜色越浅。对于同种类型细胞，颜色深浅与细胞数量在一定限度内呈线性关系。

本试剂盒为即用型溶液，无需再行配制，可直接用于96孔板细胞实验，省略了细胞洗涤与收集等步骤。该试剂盒可用于细胞因子等诱导的细胞增殖检测，也可用于抗癌药物等对细胞有毒试剂诱导的细胞毒性检测，或一些药物诱导的细胞生长抑制检测。

操作步骤：（仅供参考）

一、制作标准曲线

1.先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量，然后接种细胞。

2.按比例依次用培养基等比稀释成一个细胞浓度梯度，一般要做3-5个细胞浓度梯度，每组3-6个复孔。

3.接种后培养至细胞贴壁，然后加CCK-8溶液培养一定时间后测定OD值，制作出一条以细胞数量为横坐标（X轴），OD值为纵坐标（Y轴）的标准曲线。

4.根据此标准曲线可以测定出未知样品的细胞数量（试用此标准曲线的前提是实验的条件要一致，便于确定细胞的接种数量以及加入CCK-8后的培养时间。）

二、细胞活性检测

1.在96孔板中接种细胞悬液（100μL/孔）。将培养板放在培养箱中预培养（在37℃，5% CO2的条件下）。

2.向每孔加入 10μL CCK-8溶液（注意不要在孔中生成气泡，它们会影响OD值的读数）。

3.将培养板在培养箱内孵育1-4小时。

4.用酶标仪测定在450nm处的吸光度。

5.如果暂时不测定OD值，打算以后测定的话，可以向每孔中加入 10μL 0.1M的HCl或者1%SDS(W/V)溶液，并遮盖培养板在室温条件下避光保存。在24小时内吸光度不会发生变化。

 三、细胞增值-毒性检测

1.在 96 孔板中配置 100μL的细胞悬液。将培养板置于培养箱预培养24小时（在 37 ℃，5% CO2 的条件下）。

2.向培养板加入10μL不同浓度的待测物质。在培养箱孵育一段时间（例如：6、12、24或48小时）。

3.向每孔加入10μL CCK-8溶液（注意不要在孔中生成气泡，它们会影响 OD 值的读数）。如果待测物质有氧化性或还原性的话，可在加CCK-8溶液之前更换新鲜培养基（除去培养基，并用培养基洗涤细胞两次，然后加入新的培养基），去掉药物影响。

4.将培养板在培养箱内孵育1-4小时，用酶标仪测定在450nm处的吸光度。

5.如果暂时不测定 OD 值，可以向每孔中加入10μL 0.1M的HCl或者1%SDS(W/V)溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。在24小时内吸光度不会发生变化。

活力计算：

细胞活力（％）=[A(加药)－A(空白)]／[ A(0 加药)－A(空白)]×100

A（加药）：具有细胞、CCK-8溶液和药物溶液的孔的吸光度

A（空白）：具有培养基和 CCK-8溶液而没有细胞的孔的吸光度

A（0加药）：具有细胞、CCK-8溶液而没有药物溶液的孔的吸光度

细胞活力：细胞增殖活力或细胞毒性活力

注意事项：

1.本试剂颜色应为粉红色，如果发现溶液变黄应弃用。

2.由于使用96孔板进行检测，如果细胞培养时间较长，一定要注意蒸发问题。由于96孔板周围一圈最容易蒸发，可以采取弃用周围一圈的办法，改加相同量的PBS、水或培养液。

3.本试剂盒的检测依赖于脱氢酶催化的反应，所以还原剂(例如一些抗氧化剂)会干扰检测，如果待检测体系中存在较多的还原剂，需设法去除。

4.建议先做几个孔摸索接种细胞的数量和加入CCK-8试剂后的培养时间，白细胞可能培养时间较长。

5.当使用标准96孔板时，贴壁细胞的最小接种量至少为1000个/孔 (100μL培养基)。检测白细胞时的灵敏度相对较低，因此推荐接种量不低于2500 个/孔 (100μL培养基)。如果要使用24孔板或6孔板实验，请先计算每孔相应的接种量，并按照每孔培养基总体积的10%加入CCK-8溶液。

6.如果没有450nm的滤光片，可以使用吸光度在430-490nm之间的滤光片，但是450nm检测灵敏度最高。

7.培养基中酚红的吸光度可以在计算时，通过扣除空白孔中本底的吸光度而消去，因此不会对检测造成影响。

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标题:Bisphenol A and Polychlorinated Biphenyls Enhance the Cancer Stem Cell Properties of Human Ovarian Cancer Cells by Activating the WNT Signaling Pathway

成员:郭一凡

论文因子:5.108 31918092

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标题:A self-powered intracardiac pacemaker in swine model

成员:Liu Zhuo, Hu Yiran, Qu Xuecheng, Liu Ying, Cheng Sijing, Zhang Zhengmin, Shan Yizhu, Luo Ruizeng, Weng Sixian, Li Hui, Niu Hongxia, Gu Min, Yao Yan, Shi Bojing, Wang Ningning, Hua Wei, Li Zhou, Wang Zhong Lin

论文因子:16.6 发表期刊:Nature Communications pmid:38218947

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标题:Biomimetic manganese-eumelanin nanocomposites for combined hyperthermia-immunotherapy against prostate cancer

成员:惠辉

论文因子:10.435 发表期刊:Journal of Nanobiotechnology pmid:35073918

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注意：以上文献 仅供参考

CCK-8试剂盒(细胞增殖及毒性检测试剂盒)

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