产品名称: α-淀粉酶活性检测试剂盒

产品英文名: α-amylase Assay Kit

产品货号：BC0610          产地：北京市通州区马驹桥联东U谷8三楼

产品规格：50管/24样        产品商标：solarbio
保存与运输：4℃保存或-20℃保存；            参考价格：450
库存状态：现货                          
关键字: α-淀粉酶检测试剂盒|淀粉酶检测试剂盒|α-淀粉酶|试剂盒

简要介绍：
淀粉酶负责水解淀粉，包括α-淀粉酶和β-淀粉酶。α-淀粉酶(EC 3.2.1.1)可随机地作用于淀粉中的α-1,4-糖苷键，生成葡萄糖、麦芽糖、麦芽三糖、糊精等还原糖，同时使淀粉的粘度降低，因此又称为液化酶。
    还原糖还原3,5-二硝基水杨酸生成棕红色物质。β-淀粉酶不耐热，在70℃钝化15min，从而测定α-淀粉酶活性。

产品详细描述
产品内容：
试剂一：液体40mL×1瓶，常温保存，若有黄色晶体析出，需加热溶解后再用；
试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存。临用前加入20mL蒸馏水，置于常温水中并加热煮沸，期间不断搅拌粉剂溶解；
标准品：粉剂×1支，10mg无水葡萄糖。
产品说明：
淀粉酶负责水解淀粉，包括α-淀粉酶和β-淀粉酶。α-淀粉酶(EC 3.2.1.1)可随机地作用于淀粉中的α-1,4-糖苷键，生成葡萄糖、麦芽糖、麦芽三糖、糊精等还原糖，同时使淀粉的粘度降低，因此又称为液化酶。
淀粉水解酶催化淀粉水解生成还原糖，还原糖还原3,5-二硝基水杨酸生成棕红色物质，在540 nm有吸收峰；通过测定540 nm吸光度增加速率，计算淀粉酶活性。α-AL耐热，但是β-淀粉酶可在70℃钝化15min。因此粗酶液经过70℃钝化15min，就只有α-AL能够催化淀粉水解。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、玻璃比色皿、研钵和蒸馏水。
操作步骤：
一、粗酶液提取：
称取约0.1g样本，加0.8mL蒸馏水匀浆；匀浆后在室温下放置提取15min，每隔5min振荡1次，使其充分提取；6000g，常温离心10min，吸取上清液并加蒸馏水定容10 mL，摇匀，即为淀粉酶原液。
二、测定步骤和加样表：

1. 分光光度计或者酶标仪预热30min以上，调节波长540nm。
2. 将葡萄糖用蒸馏水稀释为0.25、0.125、0.0625、0.03125、0.015625、0.0078和0.0039 mg/mL的标准溶液。
3. 按操作表依次加入各试剂：

混匀，90℃水浴10min，蒸馏水调零，540nm处读取对照管、测定管、标准管、空白管吸光度，分别记为A对照、A测定、A标准和A空白，计算ΔA测定=A测定-A对照，ΔA标准=A标准-A空白。
三、α-淀粉酶活性计算：

1. 标准曲线的绘制

以ΔA标准为y轴，以标准溶液浓度为x轴，绘制标准曲线，得到方程y=kx+b。将
ΔA测定带入方程得到x（mg/mL）。
2、α淀粉酶活性的计算
（1）按照样本质量计算
单位定义：每g 组织每分钟催化产生1mg 还原糖定义为1 个酶活力单位。
α- 淀粉酶活性(mg/min/g 鲜重)=x×V 样÷(W×V 样÷V 样总)÷T=2×x÷W
（2）按照蛋白质含量计算
单位定义：每mg 组织蛋白每分钟催化产生1mg 还原糖定义为1 个酶活性单位。
α-淀粉酶活性(mg/min/mg prot)= x×V 样÷（V 样×Cpr）÷T==0.2×x÷Cpr
（3）血清（浆）样本中α-淀粉酶活性计算
单位定义：每ml血清（浆）每分钟催化产生1mg 还原糖定义为1 个酶活性单位。
α-淀粉酶活性(mg/ml)= x÷T=0.2×x
V 样：加入反应体系中样本体积，0.25 mL；V 样总：提取液总体积，10 mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；T：反应时间，5min。
注意事项：
当测定的吸光值大于1时，可以对样本进行适当稀释后测定。

相关文献：
《Effects of extraction methods on the physicochemical characteristics and biological activities of polysaccharides from okra (Abelmoschus esculentus)》 作者:QinYuan1ShangLin1YuanFuXi-RuiNieWenLiuYanSuQiao-HongHanLiZhaoQingZhangDe-RongLinWenQinDing-TaoWu 期刊:International Journal of Biological Macromolecules 影响因子:3.909 PMID:30639655

α-淀粉酶活性检测试剂盒