通用RT-PCR试剂盒（AMV）

产品简介：本试剂盒适用于各种 RNA 制品的反转录反应以及随后的 PCR 扩增。它采用 AMV 进行反转录反应，能够获得更长的反转录产物。同时，在 25ul 反转录体系和 50ul PCR 反应体系中，还可以一次性得到足够量的 PCR 产物用于后续的克隆实验。本试剂盒中配置的酶均为进口的酶。RT 酶采用进口的 AMV，所以 cDNA 更长，基因的信息保留得更完整！反转录过程中特异的 RNase 抑制剂可有效降低由于外源 RNase 污染而导致实验失败的风险。本试剂盒使用方便、快捷，可广泛用于 cDNA 克隆及目的基因检测等分子生物学实验。

操作步骤：

一、反转录反应

1、在冰浴的无菌无 RNase 的离心管中加入如下反应成分： 0.5ug RNA 模板 5ul Oligo(dT)16引物补 RNase-free ddH2O 11.5ul 2、70℃保温 5min 后迅速在冰上冷却 5min，简短离心收集反应液后加入以下各组分： 5ul 5×AMV Buffer 2.5ul dNTPs 0.5ul RNasin 0.5ul AMV 补 RNase-free ddH2O 25ul 3、42℃温浴 60min，如果是用随机引物，请将离心管置 37℃温浴 60min。 4、反应后将离心管置冰上，反应产物可用于进行后续实验或-20℃保存。

二、PCR 反应

1、按以下各组分配制 50ul PCR 反应体系： 10×PCR Buffer 5ul dNTPs 1ul 上游引物（用户自备 10um） 1ul 下游引物（用户自备 10um） 1ul RT 反应产物 2ul Taq Polymerase 0.5ul ddH2O x ul Total Volume 50ul 2、混匀后短暂离心，PCR 仪扩增，琼脂糖凝胶电泳观察结果。注意事项： 1、用于 cDNA 合成反应的相关试剂和耗材尽可能用 DEPC 进行处理，并在高压灭菌后使用。有些试剂不能高压灭菌时，先用经过灭菌的器具、水等配制溶液后，再将溶液进行过滤除菌处理。 2、RNA 样品要避免反复多次冻融，应使 RNA 在冰浴中处于融化状态。 3、如果 PCR 效果不理想，可以适当优化条件，比如改变退火温度或增加模板量。相关产品： R1600 DEPC 处理水 SR0060 液相 RNase 清除剂 R1200 总 RNA 提取试剂盒 SR0080 RNAsaver RNA 长效保存液 R1050 5×RNA Loading Buf er RP1100 通用 RT-PCR 试剂盒(M-MLV) PC2440 Random PC2450 Oligo T16 D1020 10×DNA 上样缓冲液 T1060 50×TAE 缓冲液

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