细胞凋亡染色试剂盒的使用详细说明
使用说明 ：
一 、 制作标准曲线 （ 测定细胞具体数量时）
1、先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量，然后接种细胞。
2、按比例依次用培养基等比稀释成一个细胞浓度梯度，一般要做 3-5 个细胞浓度梯度，每组 3-6 个复孔。
3、接种后培养细胞贴壁，然后加 CCK-8 试剂培养一定时间后测定 OD 值，制作出一条以细胞数量为横坐标（X 轴） ，OD 值为纵坐标（Y 轴）的标准曲线。根据此标准曲线可以测定出未知样品的细胞数量（试用此标准曲线的前提是实验的条件要一致，便于确定细胞的接种数量以及加入 CCK-8 后的培养时间。 ）
二 、 细胞活性检测
1、在 96 孔板中接种细胞悬液（100?L/孔） 。将培养板放在培养箱中预培养（在 37℃,5% CO 2 的条件下） 。
2、向每孔加入 10?L CCK-8 溶液（注意不要在孔中生成气泡，它们会影响 OD 值的读数） 。
3、将培养板在培养箱内孵育 1-4 小时。
4、用酶标仪测定在 450nm 处的吸光度。
5、如果暂时不测定 OD 值，打算以后测定的话，可以向每孔中加入 10?L 0.1M 的 HCl 或者 1%SDS(W/V)溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。在 24 小时内吸光度不会发生变化。
三 、 细胞增值- 毒性检测
1、 在 96 孔板中配置 100 ?L 的细胞悬液。 将培养板在培养箱预培养 24 小时 （在 37 ℃， 5% CO2 的条件下） 。
2、 向培养板加入 10?L 不同浓度的待测物质。 在培养箱孵育一段适当的时间 （例如： 6、 12、 24 或 48 小时） 。
3、向每孔加入 10 ?L CCK-8 溶液（注意不要在孔中生成气泡，它们会影响 OD 值的读数） 。如果待测物质有氧化性或还原性的话，可在加 CCK-8 之前更换新鲜培养基（除去培养基，并用培养基洗涤细胞两次，然后加入新的培养基） ，去掉药物影响。
4、将培养板在培养箱内孵育 1-4 小时。
5、用酶标仪测定在 450 nm 处的吸光度。
6、如果暂时不测定 OD 值，打算以后测定的话，可以向每孔中加入 10?L 0.1M 的 HCl 或者 1%SDS(W/V)溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。在 24 小时内吸光度不会发生变化。
活力计算：.
细胞活力（％）=[A(加药)－A(空白)]／[ A(0 加药)－A(空白)]×100
A（加药） ：具有细胞、CCK-8 溶液和药物溶液的孔的吸光度
A（空白） ：具有培养基和 CCK-8 溶液而没有细胞的孔的吸光度
A（0 加药） ：具有细胞、CCK-8 溶液而没有药物溶液的孔的吸光度
细胞活力：细胞增殖活力或细胞毒性活力
