脱氢抗坏血酸还原酶(DHAR)活性检测试剂盒

脱氢抗坏血酸还原酶（DHAR）活性测定试剂盒说明书
微量法
注意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。
货号: BC0665
规格: 100T/48S
产品内容：
提取液：液体 110 mL×1 瓶，4℃保存。
试剂一：液体 20 mL×1 瓶，4℃保存。
试剂二：粉剂×1 瓶，4℃避光保存。临用前加入 3mL 蒸馏水充分溶解。
试剂三：粉剂×1 瓶，4℃避光保存。临用前加入 3.5 mL 蒸馏水充分溶解。
试剂四：液体 8 mL×1 瓶，4℃避光保存。
标准品：粉剂 10 mg×1 支，4℃避光保存。临用前加入 1 mL 蒸馏水，配制成 10 mg/mL 的标准溶液。

产品简介：
脱氢抗坏血酸还原酶（Dehydroascorbate reductase，DHAR）是植物体内一种重要的抗氧化酶，是抗坏血酸-谷胱甘肽氧化循环中促进抗坏血酸再生的关键酶。DHAR 在循环中利用抗坏血酸维持植物体内抗坏血酸的正常代谢水平，保护细胞组分抵御氧化损伤方面发挥着重要作用。DHAR 催化还原性谷胱甘肽（GSH）还原脱氢抗坏血酸（DHA）生成 AsA，GSH 能和 5,5’-二硫代-双-（2-硝ji苯甲酸）（DTNB）反应产生 2-硝基-5-巯ji苯甲酸（TNB）和谷胱甘肽二硫化物（GSSG）。TNB 在波长 412 nm 处具有大光吸收。通过测定 GSH 的减少速率，计算 DHAR 活性。

自备仪器和用品：
研钵/匀浆器、冰、低温离心机、可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、微量玻璃比色皿/96 孔板、可调式移液器和蒸馏水。 

操作步骤：
一、样品的处理
1. 组织：按照组织质量（g）: 提取液体积（mL）1 : 5-10 的比例（建议称取约 0.1 g 组织，加提取液 1 mL），冰上充分研磨匀浆，8000 g，4℃ 离心 10 min，取上清液置于冰上待测。
2. 细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为 500-1000：1 的比例（建议 500 万细胞加入 1 mL 提取液），冰浴超声超声破碎细胞（功率 300w，超声 3s，间隔 7s，总时间 3 min）；然后 8000 g，4℃，离心 10 min，取上清置于冰上待测。
3. 血清等液体：直接检测。

二、DHAR 测定操作：
1. 分光光度计/酶标仪预热 30 min，调节波长到 412 nm，蒸馏水调零。
2. 标准溶液的配制：将 10 mg/mL 标准液用蒸馏水稀释为 0.5、0.25、0.125、0.0625、0.03125、0.0015625mg/mL 的标准溶液备用。

相关文献：
《Exogenous 24-Epibrassinolide alleviates oxidative damage from copper stress in grape (Vitis vinifera L.) cuttings》 作者:Ya-li Zhou,Su-fang Huo,Li-ting Wang,Jiang-fei Meng,Zhen-wen Zhang,Zhu-mei Xi 期刊:Plant Physiology and Biochemistry 影响因子:3.404 PMID:30099273
 

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