谷氨酰胺合成酶(GS)活性检测试剂盒

产品名称: 谷氨酰胺合成酶(GS)活性检测试剂盒

产品英文名: Glutamine Synthetase（GS）Assay Kit

产品货号：BC0910            产地：北京市通州区马驹桥联东U谷8三楼

产品规格：50管/24样         产品商标：solarbio
保存与运输：4℃保存或-20℃保存；            参考价格：360
库存状态：现货                          
关键字: ：  谷氨酰胺合成酶检测试剂盒|GS检测试剂盒|谷氨酰胺合成酶|试剂盒

简要介绍：
GS（EC 6.3.1.2）主要存在于植物中，是生物体内氨同化的关键酶之一，催化铵离子和谷氨酸合成谷氨酰胺，不仅可以防止过多的铵离子对生物有毒性，而且谷氨酰胺也是氨的主要储存和运输形式。
    GS 在ATP 和Mg2+存在下，催化铵离子和谷氨酸合成谷氨酰胺；谷氨酰胺进一步转化为γ─谷氨酰基异羟肟酸，在酸性条件下与铁形成红色的络合物；该络合物在540nm 处有大吸收峰，可用分光光度计测定。

产品详细描述
产品内容：
提取液：液体30mL×1 瓶，4℃保存。
    试剂一：液体10mL×1 瓶，-20℃保存。
    试剂二：液体10mL×1 瓶，-20℃保存。
    试剂三： 粉剂×2 瓶，-20℃保存。用时每瓶加入5mL蒸馏水充分溶解备用，用不完的试剂仍-20℃保存。
    试剂四：液体15mL×1 瓶，4℃保存。

产品说明：
GS（EC 6.3.1.2）主要存在于植物中，是生物体内氨同化的关键酶之一，催化铵离子和谷氨酸合成谷氨酰胺，不仅可以防止过多的铵离子对生物有毒性，而且谷氨酰胺也是氨的主要储存和运输形式。
    GS 在ATP 和Mg2+存在下，催化铵离子和谷氨酸合成谷氨酰胺；谷氨酰胺进一步转化为γ─谷氨酰基异羟肟酸，在酸性条件下与铁形成红色的络合物；该络合物在540nm 处有大吸收峰，可用分光光度计测定。
实验需自备的仪器和用品：
 可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 mL 玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
操作步骤：
一、样品测定的准备 

1. 细菌、细胞或组织样品的制备：

细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（10⁴ 个）：提取液体积（mL）为500~1000：1 的比例（建议500 万细菌或细胞加入1mL 提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30 次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10 的比例（建议称取约0.1g 组织，加入1mL 提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

1. 血清（浆）样品：直接检测。
2. 测定操作表
3. 分光光度计预热30min 以上，调节波长540nm，蒸馏水调零。
4. 在EP 管中加入下列试剂：

混匀，静置10min 后，5000g，常温离心10min，取上清液测定540nm 处的吸光值A。△A=A测定管-A 对照管。每个测定管需设一个对照管。


三、计算
GS 活力单位的计算

1. 血清（浆）GS 活性

单位定义：每mL 血清（浆）在每mL 反应体系中每min 使540 下吸光值变化0.01 定义为一个酶活力单位。
计算公式：GS（U/mL）=ΔA×V 反总÷V 样÷0.01÷T =19×ΔA

1. 组织、细菌或细胞GS 活性
2. 按样本蛋白浓度计算：

单位的定义：每mg 组织蛋白在每mL 反应体系中每min 使540nm 下吸光值变化0.01 定义为一个酶活力单位。
GS（U/mg prot）＝ΔA×V 反总÷（Cpr×V 样）÷0.01÷T =19×ΔA÷Cpr

1. 按样本鲜重计算：

单位的定义：每g 组织在每mL 反应体系中每min 使540nm 下吸光值变化0.01 定义为一个酶活力单位。
GS（U/g 鲜重）＝ΔA×V 反总÷(W× V 样÷V 样总)÷0.01÷T =19×ΔA÷W

1. 按细菌或细胞密度计算

单位定义：每1 万个细菌或细胞在每mL 反应体系中每min 使540nm 下吸光值变化0.01 定义为一个酶活力单位。
GS（U/10⁴ cell）＝ΔA×V 反总÷(500×V 样÷V 样总)÷0.01÷T =0.038×ΔA
V 反总：反应体系总体积，0.8mL； V 样：加入样本体积，0.14mL；V 样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，30 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500 万。

相关文献：
《Possible roles of?glutamine synthetase in?responding to?environmental changes in?a?scleractinian coral》 作者:Yilu?Su,Zhi?Zhou,Xiaopeng?Yu 期刊:Molecular Biology Reports  影响因子:2.107 PMID:
《Knockout of SlSBPASE Suppresses Carbon Assimilation and Alters Nitrogen Metabolism in Tomato Plants》 作者:Fei Ding, Qiannan Hu, Meiling Wang and Shuoxin Zhang 期刊:International Journal of Molecular Sciences 影响因子:4.183 PMID:30558146
《Ammonium Nitrogen Tolerant Chlorella Strain Screening and Its Damaging Effects on Photosynthesis》 作者:Jie Wang, Wei Zhou,Hui Chen,Jiao Zhan, Chenliu He,and Qiang Wang 期刊:Frontier in Immunology 影响因子:4.259 PMID:30666245
《Modulating plant growth–metabolism coordination for sustainable agriculture》 作者:Shan Li, Yonghang Tian, Kun Wu, Yafeng Y, Jianping Yu, Jianqing Zhang, Qian Liu, Mengyun Hu, Hui Li, Yiping Tong,Nicholas P. Harberd4 & Xiangdong Fu 期刊:Nature 影响因子:43.07 PMID:30111841