磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶检测试剂盒

磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK)活性检测试剂盒说明书
紫外分光光度法

注意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。
货号：BC3310
规格：50T/48S
产品内容：
提取液：液体 60mL×1 瓶，4℃保存；
试剂一：液体 45 mL×1 瓶，4℃保存；
试剂二：粉剂 35 mL×1 瓶，-20℃避光保存；临用前加入 35mL 试剂一溶解。可溶解后分装-20℃保存，避免反复冻融。
试剂三：液体 45µL×1 支，4℃避光保存；临用前加入蒸馏水按体积比 1：120 稀释，现用现配；
试剂四：液体 155µL×1 支，4℃避光保存；临用前加入蒸馏水按体积比 7：250 稀释，现用现配；
试剂五：粉剂×1 瓶，-20℃避光保存；临用前加入 2.5mL 蒸馏水充分溶解；可溶解后分装-20℃保存，避免反复冻融。

产品说明：
PEPCK（EC 4.1.1.32）广泛存在于动物、开花植物、藻类、部分真菌和细菌中。该酶催化草酰乙酸转化为磷酸烯醇式丙酮酸,是调节糖异生途径的第1限速酶。PEPCK 催化草酰乙酸生成磷酸烯醇式丙酮酸和 CO2，丙酮酸激酶和乳酸脱氢酶进一步依次催化NADH 氧化生成 NAD+，在 340nm 下测定 NADH 下降速率，即可反映 PEPCK 活性。

试验中所需的仪器和试剂：
紫外分光光度计、低温离心机、水浴锅、1mL 石英比色皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

操作步骤：
一、粗酶液提取：
组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入1mL 提取液）进行冰浴匀浆，然后 8000g，4℃，离心 10min，取上清，置冰上待测。

细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

血清（浆）样品：直接检测。

二、测定步骤：
1、紫外分光光度计预热 30min 以上，调节波长 340nm，蒸馏水调零。
2、工作液的配制：将试剂二、试剂三、试剂四按 7:1:1（V:V:V）的比例配制工作液，工作液现用现配。
3、将工作液置于 37℃(哺乳动物)或 25℃(其它物种)预热 5 分钟。
4、操作表：在 1mL 石英比色皿中依次加入下列试剂：

相关文献：

《Hepatic c-Jun regulates glucose metabolism via FGF21 and modulates body temperature through the neural signals》 作者:FeiXiao15YajieGuo15JialiDeng1FeixiangYuan1YuzhongXiao1LijianHui2YuLi1ZhiminHu1YuncaiZhou3KaiLi3XiaoHan3QichenFang4WeipingJia4YanChen1HaoYing1QiweiZhai1ShanghaiChen1FeifanGuo 期刊:Molecular Metabolism 影响因子:6.181 PMID:30579932

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