1. Q：G8140 绿色荧光核酸染料(10000×)  染色，条带不亮是为什么？

A：绿色荧光核酸染料特别适合于大片段 DNA 的检测(大于 1kb 的片段,检测灵敏度与 EB 相当);当 DNA 片段小于 1kb 时,检测灵敏度低于 EB,特别是低于 500bp 的片段, 绿色荧光核酸染料可能亮度很弱或检测不到.如果检测小片段的 DNA,请选用G8142,该染色剂适合于检测所有片段大小的 DNA 片段。

一般的，100mL胶加10微升染料，如果觉得荧光较弱，可适当增加染料用量。

2. Q：使用G8142 GoldView II 核酸染料 进行1%琼脂糖凝胶电泳，胶回收PCR产物时，电泳结果显示MARK和目的条带均不清晰，呈弥散状，后续实验无法进行。

A：使用时，请将商品化的 Marker 用 1×DNA Loading Buffer 作 5-10 倍的稀释，上样 1-10µl, 以得到较好的结果(通常稀释 10 倍后上样 5ul)。对于待检测样品，通常仅需 1-2µl 即可。如果浓度较高，也须作一定倍数稀释，否则会造成条带不整，影响迁移速率。凝胶回收请选择点染方法。

3. Q：提取量不够？

A：一般的，增加样本量是Z简单的方法。此外，吸附膜的主要原理是低温结合、高温洗脱。因此，在吸附柱静置时，放在4°结合3-5min，再重新吸附一次，通过增加结合次数达到提高提取量的目的。如果提取的质粒较小或拷贝数很低，可以在吸附那一步适当加入少量的1/5-1/3的异丙醇，提高回收率（一般不建议）

4. Q：D1140 提取量有多少？

A：因质粒拷贝数的差异性，不一定能够上百。

5. Q：有专门用于提取质粒的柱子吗？

A：N1010和N1011-A都可以

6. Q：N1011-B 可以用于提取质粒吗？

A：不可以。只能用于提取基因组，提取质粒会造成质粒虚高。

7. Q：N1010 系列的柱子，可以容纳多少体积溶液？

A：650-700微升左右

8. Q：提取出的质粒用于测序，可以用你们的洗脱缓冲液吗？

A：可以的，一般情况下影响不大。如果不放心，可以换用无菌ddH2O洗脱。

9. Q：提取质粒后，做转化，转不出来？

A：一般优先怀疑感受态，若确认感受态没问题，再检测是否用错抗生素或是操作中有问题。如果确认是质粒的原因，可加大转化质粒的用量（一般的，质粒转化仅需1微升左右（质粒浓度在500ng/ul左右），若质粒浓度很低（小于100ng/ul），可以将质粒用量提高至10微升）

10. Q：提取出的质粒，PCR没有条带？

A：1.检验引物是否适用；2.检验程序是否合适；3.检验自己操作过程中是否有问题；4.质粒浓度不可太高（一般PCR的质粒浓度在50-100ng/ul之间）

11. Q：转化质粒是，可以加抗生素吗？

A：可以的，不会影响质粒转化效率。

12. Q：没有提出任何质粒？

A:1.菌体老化（重新转化或活化菌株）？2.裂解不充分；3.菌体中真的无质粒；4.检查试剂盒中的试剂有无出现沉淀；5.加洗脱液时，没有加到吸附膜上或加的体积太少

13. Q：提出的质粒PCR、酶切鉴定中有一个有问题，能用吗？

A：不能。

14. Q：P3110 pET-28a（+） 跑胶检测 质粒大小和说明书上大小不一致。

A：如果想要跑胶检测质粒大小，需要先将质粒进行单酶切，将质粒变为线性的再进行跑胶鉴定。超螺旋或是开环状态的质粒都无法表示质粒的大小。如果客户不认可单酶切结果，可以直接测序检测。

15. Q：R1030 RNase A溶液(10mg/ml ) 使用RNase A从大肠杆菌中提质粒，质粒溶液中的 RNA没有去掉。

A：RNase A溶液 工作浓度是200ug/ml  ；而客户这边10ug/ml  建议增大用量。

16. Q：质粒全没有被内切酶切割？

A：1.酶活低，可以延长时间或是用量；2.质粒和酶活不匹配，优化酶切条件；3.质粒不纯，含有SDS，酚，EDTA等内切酶抑制因子；4.质粒上的酶切位点突变了；5. DNA不存在该酶识别顺序；6.buffer和酶不匹配

17. Q：16.质粒酶切不全？

A：1.酶活低，可以延长时间或是用量；2.质粒和酶活不匹配，优化酶切条件；3.没有混匀酶切体系；4.buffer和酶不匹配

18. Q：DNA片段数目多于理伦值?

A：1.内切酶星状活性；2.其它内切酶污染：换一支新的酶或buffer；3；底物中含其它DNA杂质：重新提质粒

19. Q：跑胶检验时，条带拖尾，模糊？

A：1.浓度过高；2.盐离子高；3.有蛋白污染；4.降解了；5.换新的电泳液

20. Q：4.Q：那个柱子可以用于胶回收？（质粒提取、胶回收、基因组、PAGE凝胶回收的试剂盒中的柱子）

A: N1030 离心式过滤柱，主要用于过滤碎胶等较大的杂质

   N1010/N1012/N1011-A 可用于胶回收（质粒、片段等）

   N1011-B  主要用于提基因组，不用于提质粒（会虚高）

21. Q：质粒提取类试剂盒中，所有的酶都是单发的吗？

A：是的。因为一般都要-20保存。所以不放在试剂盒里。以附件形式单发（冰盒/冰袋）

22. Q：SN0020 细胞核提取试剂盒  小鼠肝脏组织，匀浆后离不下去。

A：加热一下，让溶液不要那么粘稠。