产品简介
是一种用于从小鼠外周血中分离中性粒细胞的试剂盒,其主要组成包括试剂A、试剂B、鼠红细胞沉降液、红细胞裂解液和细胞洗涤液等。 小鼠外周血中性粒细胞分离(Plus)试剂盒
产品分类
产品简介:
同常规试剂盒相比,本试剂盒通过优化分离液相关成分,进一步提高了小鼠外周血中性粒细胞的分离纯度,更适用于流式细胞仪分选等下游实验操作。
产品组成:
试剂盒组分 | 规格 | 保存条件 |
试剂A | 200mL | 2~8℃ |
试剂B | 100mL | 2~8℃ |
鼠红细胞沉降液 | 100mL | 室温 |
红细胞裂解液 | 100mL | 室温 |
细胞洗涤液 | 200mL | 室温 |
操作步骤:(仅供参考)
1、 沉降去除红细胞:取新鲜抗凝血与血液稀释液(注射用生理盐水或1XPBS)及红细胞沉降液按照1:1:1比例混匀,室温下静置30-40min后,可见红细胞沉于试管底部,小心吸尽上清层(富含白细胞及血小板)用于后续细胞分离。
2、 样本分离:在15mL离心管中先加入4mL试剂A,后将2mL试剂B沿管壁缓慢叠加(45°倾斜试管)于试剂A之上,形成梯度界面,将沉降后上清小心平铺于分离液液面上方。(注意分离液与样本总体积不能超过离心管的三分之二,否则会影响分离效果。)
3、 室温条件下水平转子600-1000g,25-30minutes(血液体积越大所需离心力越大,离心时间越长,最佳分离条件需摸索,离心最大转速不超过1000g)。
4、 离心后,上层白膜层为单个核细胞层,下层白膜层为粒细胞层。
5、小心吸取粒细胞层至新的离心管中,加入10mL细胞洗涤液洗涤细胞。250g,离心10min(如有红细胞污染可依据样本体积加入适量红细胞裂解液祛除污染)。
6、 弃上清,加入5mL细胞清洗液重悬细胞,250g,离心10min。
7、 弃上清,重悬细胞备用。
注意事项:
A.开封前颠倒混匀,本分离液为无菌产品,为延长分离液保存时间,请在无菌条件下启封,避免微生物污染。
B.请根据实验需要预先无菌分装分离液试剂,并在其恢复至室温(18℃~25℃)后使用,如室内温度较低,可将分离液预热。4℃或者是![]()
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温度较低的条件下离心,可能会导致白膜层不清晰。
C.血液样本最好为新鲜抗凝血(采血2h以内),为保持中性粒细胞的活性,应避免冷冻和冷藏。
D.稀释血液或洗涤细胞,不可使用含Ca、Mg离子的缓冲液及培养液,其成分会导致血细胞凝集,大大降低细胞得率及纯度。
E.部分塑料制品(如聚苯乙烯)因其带有的静电作用,可能会导致细胞挂壁,影响分离效果。
F.血液样本的粘稠度或者是温度差异,可能会影响分离效果,可以调节离心转数和离心时间,摸索最佳的分离条件。
G.如果要进一步对分离的细胞进行培养,注意全程保持无菌操作,避免微生物污染。
小鼠外周血中性粒细胞分离(Plus)试剂盒
小鼠外周血中性粒细胞分离(Plus)试剂盒