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产品名称:细胞培养试剂人或各种动物外周血及脏器组织中性粒细胞分离液

产品型号:

产品报价:

产品特点:细胞培养试剂人或各种动物外周血及脏器组织中性粒细胞分离液
本品为带有乳光或微乳光的灭菌水溶液。主要成分是Ficoll 400与泛影酸葡甲胺。适用于从人或各种动物血液及脏器组织中分离中性粒细胞,在医疗和医学生物学研究中广泛应用。

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细胞培养试剂人或各种动物外周血及脏器组织中性粒细胞分离液的详细资料:

细胞培养试剂人或各种动物外周血及脏器组织中性粒细胞分离液
规格:200ml/kit
保存:室温避光储存,有效期少 2 年。


产品简介:
    本品为带有乳光或微乳光的灭菌水溶液。主要成分是Ficoll 400与泛影酸葡甲胺。适用于从人或各种动物血液及脏器组织中分离中性粒细胞,在医疗和医学生物学研究中广泛应用。
其他人及动物多种比重细胞分离液。注:因不同种属不同比重分离液的细胞离散系数及细胞带电不同,所以用户在定制分离液时应提供所需分离液的比重、动物的种属及被分离细胞的名称。
一、  分离方法说明及图例
     A. 取1ml新鲜抗凝血,与全血及组织稀释液1:1 混匀后小心加于1份本分离液之液面上;
或取 1ml 组织单细胞悬液(具体制备方法详见二、组织单细胞悬液的制备)小心加于1份本分离液之液面上;
     B. 以500g(约1800转/分)离心25分钟(半径15cm水平转子)。
此时离心管中由上下细胞分为四层。*层;为血浆层。第二层;为环状乳白色单个核细胞层。第三层;为略带浑浊的分离液层(富集一定量的中性粒细胞)。第四层;为红细胞层。弃去*层血浆层及第二层细胞,收集第三层分离液层和第四层红细胞层,放入含细胞洗涤液10ml的试管中,充分混匀后,以500g(约1800转/分)离心30分钟,沉淀经1次洗涤后用红细胞裂解液裂解红细胞,再经3次洗涤去除红细胞内溶物和碎片后取沉淀细胞即为所需中性粒细胞。
     注:A. 细胞提取率约 80%。
         B. 红细胞裂解过程参考“红细胞裂解液使用说明” 。


二、组织单细胞悬液的制备
     注:A.本说明只提供机械匀浆制备单细胞悬液的方法 本说明只提供机械匀浆制备单细胞悬液的方法,酶消化法由于各实验室选取的消化酶种类各不相同,请各实验室自行选择进行试验。
     B. 全过程及所需试剂要求无菌环境 全过程及所需试剂要求无菌环境。
剪碎法:将组织块放入平皿后,加入少量组织匀浆液及20%胎牛血清;用眼科剪将组织剪匀浆状,加入5ml组织匀浆液及20%胎牛血清;用吸管吸取组织匀浆,用100目不锈钢滤网过滤到试管内;离心沉淀1500转/分×3 min,再用细胞洗涤液清洗3次,每次以500rpm短时低速离心除去细胞碎片,以200目不锈钢滤网过滤去细胞团块。作细胞计数并调整细胞浓度为(2~5)×10 7 个/ml。常温下放置, 待测细胞的活力。分离前用20%胎牛血清或全血及组织稀释液悬起细胞浓度为2×108-1×10 9 个/ml的单细胞悬液备用。
      匀浆器法:用眼科剪将组织剪成小块;放入70ml组织研磨器内,加入2ml组织匀浆液及20%胎牛血清;缓慢转动研棒,研磨匀浆;用5ml组织匀浆液及20%胎牛血清冲洗研器;收集细胞悬液,经200目不锈钢滤网过滤;离心沉淀800rpm×2min ,再用细胞洗涤液洗3次,离心沉淀。作细胞计数并调整细胞浓度为(2~5)×10 7 个/ml。常温下放置, 待测细胞的活力。分离前用20%胎牛血清或全血及组织稀释液悬起细胞浓度为2×10 8 -1×10 9 个/ml的单细胞悬液备用。


细胞计数方法:
    细胞计数法是用来计数细胞悬液中细胞数量的一种方法。一般利用计数板(血球计数板)进行。既可用于分离(散)细胞培养接种前计数所制备的细胞悬液中的细胞数量,也可用于对培养物的细胞数量进行计数。不论计数的对象如何,均须制备分散的细胞悬液。


计数与计算过程
    1)、在细胞计数板中央放置计数的盖玻片。
    2)、用玻璃虹吸管吸取细胞,让虹吸管在盖玻片上或下侧的计数板凹蹧处流出悬液,盖玻片被液体充满为止。
    3)、置显微镜下计数四角大方格内的细胞总数。对于压线的细胞只计数在上线和左线者,对于细胞团按单个细胞计数。
    4)、按下式计数细胞悬液的密度: 细胞密度=(4个大格细胞总数/4)×10 4 个/ml×稀释倍数公式中乘以10 4 因为计数板中每一个大格的体积为:
      1.0mm(长)×1.0mm(宽)×0.1mm(高)=0.1mm 3 而 1ml=1000mm 3

 

细胞计数要点:
    A. 进行细胞计数时,要求悬液中细胞数目不低于10 4 个/ml,如果细胞数目很少要进行离心再悬浮于少量培养液中;显微镜下计数时,遇到2个以上细胞组成的细胞团,应按单个细胞计算。如果细胞团>10%,说明细胞分散不充分; 或细胞数<200个/10mm 2 或>500个/10 mm 2 时,说明稀释不当,需重新制备细胞悬液。
    B. 要求细胞悬液中的细胞分散良好,否则影响计数准确性。
    C. 取样计数前,应充分混匀细胞悬液,尤其是多次取样计数时更要注意每次取样都要混匀,以求计数准确;
    D. 数细胞的原则是只数完整的细胞,若细胞聚集成团时,只按照一个细胞计算。如果细胞压在格线上时,则只计上线,不计下线,只计左线,不计右线。
    E. 操作时,注意盖玻片下不能有气泡,也不能让悬液流入旁边槽中,否则要重新计数。

 

三、  注意事项
    A. 本分离液是敏光型的,在运输和贮藏过程中应在18℃-25℃避光保存,启封后置4℃保存避免微生物污染。另外,本品为真空包装,未启封前置于10℃ 以下易出现白色结晶,影响分离效果。
    B. 待分离的样本要求新鲜,避免冷冻和冷藏。分离液和所分离样本一定在20℃水浴箱中复温20 分钟保证分离液和所分离样本温度在20℃±2℃时分离效果好,且所有操作过程一定要在无菌条件下进行。
    C. 由于各品牌离心机的性能不同,国内南北地区温度环境和四季的差异,可能影响分离效果,用户可以调节离心转数,调节离心的时间,摸索的分离条件(具体分离条件各实验室自定)。
    D. 好使用无静电反应的离心管,推荐使用未经过碱处理的玻璃离心管。
    E. 优抗凝剂选择:EDTA、枸橼酸、肝素。应注意在血液稀释过程中应去除抗凝剂体积 。

 

四、产品性能指标

pH 7.0-7.5
渗透压 280-340mOsmol/kg
内毒素 ≤0.5EU/ml
无菌 直接接种培养14 天后培养基澄清
澄明度及不溶性颗粒物 每50ml 溶液中含10μm 以上的不溶性微粒20 粒以下,
含25μm 以上的不溶性微粒5 粒以下


五、贮藏及保存期限
    18℃-25℃避光保存,有效期两年。启封后置4℃保存,有效期一周。
    注:若保证无微生物污染,启封后可置4℃长期保存。但应注意保存温度较低时本分离液易
出现白色结晶,影响分离效果。

 

细胞培养试剂人或各种动物外周血及脏器组织中性粒细胞分离液订购说明:

1、绝大部分产品备有现货,一般情况下都能订货当日发货。 
2、部分非常用产品,需提前1-2日预订,海外期货则需要提前3-6周预订。 
3、部分产品价格会因货期、批次等因素发生变化,若有变动以订货当日新价格为准。 
4、每日订单截止时间为16点整,部分城市可到17点整,因超过截止时间造成当日不能发货的将于次日安排发货。
5、请办理完货款后,将收据、底单等连同收货人的地址、姓名、等以传真、、短信、等形式通知我们。


运输说明:

1、极低温产品:极低温产品运输过程中加装干冰运输。用干冰把产品包裹起来,再用泡沫盒密封,胶带层层粘住泡沫盒,放入索莱宝的箱子,然后交付给合作快递,安全快速高效放心的送客户的手中,保证产品的性质稳定如一,为您的实验保驾护航。
2、低温产品:低温产品运输过程中加装索莱宝冰袋运输。事先用冰袋把产品包裹起来,再使用泡沫盒密封,用胶带严实密封泡沫盒,再放入索莱宝的箱子(保温效果少可以持续一周),然后交付给合作快递,安全快速高效放心的送客户的手中,保证产品的性质稳定如一,为您的实验保驾护航。
3、常温产品:常温产品运输过程中无需加冰或者特殊包装。产品由公司库房人员快速配货,准确快速高效的快递保证产品快速送达您的手中。

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