欢迎来北京索莱宝科技有限公司!我们将为您提供周到的服务!
首页 > 产品中心 > 细胞相关产品 > 细胞分离液 > 鹅脏器组织白细胞分离液试剂盒

产品名称:鹅脏器组织白细胞分离液试剂盒

产品型号:P3590

产品报价:

产品特点:鹅脏器组织白细胞分离液试剂盒
货号:P3590
规格:200ml/KIT
保存 :室温避光储存,有效期少 2 年。

免费咨询:010-50973159

发邮件给我们:3193328036@qq.com

分享到:

P3590鹅脏器组织白细胞分离液试剂盒的详细资料:

鹅脏器组织白细胞分离液试剂盒
货号 :P3590
规格 :200ml
保存 :室温避光储存,有效期少 2 年。

试剂盒内容 :

全血及组织稀释液 200ml
细胞洗涤液 200ml
试剂C 200ml
试剂F 200ml
说明书 1 份


脾脏组织单细胞悬液的制备方法
注 :A .全过程及所需试剂要求无菌环境 。
B .本试剂盒中不包含胶原酶,若采用酶消化法制备单细胞悬液 , 请客户根据各实验室要求另购不同类型胶原酶 。
     1. 剪碎法:将组织块放入平皿后,加入少量F液及20%胎牛血清;用眼科剪将组织剪匀浆状,加入5mlF液及20%胎牛血清;用吸管吸取组织匀浆,用100目不锈钢滤网(另购)过滤到试管内;离心沉淀1500转/分×3min,再用细胞洗涤液清洗3次,每次以500rpm短时低速离心除去细胞碎片,以200目不锈钢滤网(另购)过滤去细胞团块。作细胞计数并调整细胞浓度为(2~5)×10 7 个/ml。常温下放置, 待测细胞的活力。分离前用20%胎牛血清或全血及组织稀释液悬起细胞浓度为2×10 8 -1×10 9 个/ml的单细胞悬液备用。
     2. 匀浆器法:用眼科剪将组织剪成小块;放入70ml组织研磨器内,加入2mlF液及20%胎牛血清;缓慢转动研棒,研磨匀浆;用5mlF液及20%胎牛血清冲洗研器;收集细胞悬液,经200目不锈钢滤网(另购)过滤;
离心沉淀800rpm×2min ,再用细胞洗涤液洗3次,离心沉淀。作细胞计数并调整细胞浓度为(2~5)×10 7个/ml。常温下放置, 待测细胞的活力。分离前用20%胎牛血清或全血及组织稀释液悬起细胞浓度为2×10 8 -1×10 9 个/ml的单细胞悬液备用。
    3. 酶消化法:
     A.用F液将胶原酶稀释,终浓度为400 U/ml,于冰浴备用。
     B.取一适当大小培养皿进行操作:用镊子夹碎动物脾脏,加入稀释后的胶原酶,37℃消化20分钟。
     C.以100或200目不锈钢滤网(另购)过滤,离心沉淀800prm×2min ,再用细胞洗涤液洗3次,离心沉淀。作细胞计数并调整细胞浓度为(2~5×10 7 个/ml。常温下放置, 待测细胞的活力。分离前用20%胎牛血清或全血及组织稀释液悬起细胞浓度为2×10 8 -1×10 9 个/ml的单细胞悬液备用。

 

细胞计数方法:
    细胞计数法是用来计数细胞悬液中细胞数量的一种方法。一般利用计数板(血球计数板)进行。既可用于分离(散)细胞培养接种前计数所制备的细胞悬液中的细胞数量,也可用于对培养物的细胞数量进行计数。
    不论计数的对象如何,均须制备分散的细胞悬液。
    计数与计算过程
    1)在细胞计数板中央放置计数的盖玻片。
    2)用玻璃虹吸管吸取细胞,让虹吸管在盖玻片上或下侧的计数板凹蹧处流出悬液,盖玻片被液体充满为止。
    3)置显微镜下计数四角大方格内的细胞总数。对于压线的细胞只计数在上线和左线者,对于细胞团按单个细胞计数。
    4)按下式计数细胞悬液的密度: 细胞密度=(4个大格细胞总数/4)×10 4 个/ml×稀释倍数公式中乘以10 4 因为计数板中每一个大格的体积为:
1.0mm(长)×1.0mm(宽)×0.1mm(高)=0.1mm 3 而 1ml=1000mm 3


细胞计数要点:
    A.进行细胞计数时,要求悬液中细胞数目不低于10 4 个/ml,如果细胞数目很少要进行离心再悬浮于少量培养液中;显微镜下计数时,遇到2个以上细胞组成的细胞团,应按单个细胞计算。如果细胞团>10%,说明细胞分散不充分; 或细胞数<200个/10mm 2 或>500个/10 mm 2 时,说明稀释不当,需重新制备细胞悬液。
   B.要求细胞悬液中的细胞分散良好,否则影响计数准确性。
   C. 取样计数前, 应充分混匀细胞悬液, 尤其是多次取样计数时更要注意每次取样都要混匀, 以求计数准确;
   D.数细胞的原则是只数完整的细胞,若细胞聚集成团时,只按照一个细胞计算。如果细胞压在格线上时,则只计上线,不计下线,只计左线,不计右线。
   E. 操作时,注意盖玻片下不能有气泡,也不能让悬液流入旁边槽中,否则要重新计数。
? 脾脏淋巴细胞分离方法
   1.取1ml脾脏细胞悬液(细胞浓度为2×10 8 -1×10 9 个/ml)小心叠加在C 液之液面上(比例为1:1),20℃±2℃,400g(约1500 转/分),离心20 分钟(半径15cm 水平转子)。
   2. 此时离心管中由上下细胞分四层。*层;为稀释液层。第二层;为环状乳白色淋巴细胞层。第三层;为透明分离液层。第四层;为红细胞层。收集第二层细胞放入含细胞洗涤液4-5 毫升的试管中,充分混匀后,以500g(约1800 转/分)离心20 分钟。沉淀经反复洗涤2 次即得所需淋巴细胞。
注: 提取率约为80%。


分离图例:

三 、  注意事项
     A. 本分离液是敏光型的,在运输和贮藏过程中应在18℃-25℃避光保存,启封后置4℃保存避免微生物污染。另外,本品为真空包装,未启封前置于10℃ 以下易出现白色结晶,影响分离效果。
     B. 待分离的骨髓要求新鲜,避免冷冻和冷藏。分离液和所分离样本一定在20℃水浴箱中复温20 分钟保证分离液和所分离样本温度在20℃±2℃时分离效果好,且所有操作过程一定要在无菌条件下进行。
     C. 由于各品牌离心机的性能不同,国内南北地区温度环境和四季的差异,可能影响分离效果,用户可以调节离心转数,调节离心的时间,摸索佳的分离条件(具体分离条件各实验室自定)。
     D. 好使用无静电反应的离心管,推荐使用未经过碱处理的玻璃离心管。


四 、 产品性能指标

pH 7.0-7.5
渗透压 280-340mOsmol/kg
内毒素 ≤0.5EU/ml
无菌 直接接种培养14 天后培养基澄清
澄明度及不溶性颗粒物 每50ml 溶液中含10µm 以上的不溶性微粒20 粒以下,
含25µm 以上的不溶性微粒5 粒以下


五 、 贮藏及保存期限
     18℃-25℃避光保存,有效期两年。启封后置4℃保存,有效期一周。
     注:若保证无微生物污染,启封后可置4℃长期保存。但应注意保存温度较低时本分离液易出现白色结晶,影响分离效果。

 

鹅脏器组织白细胞分离液试剂盒订购说明:

1、绝大部分产品备有现货,一般情况下都能订货当日发货。 
2、部分非常用产品,需提前1-2日预订,海外期货则需要提前3-6周预订。 
3、部分产品价格会因货期、批次等因素发生变化,若有变动以订货当日新价格为准。 
4、每日订单截止时间为16点整,部分城市可到17点整,因超过截止时间造成当日不能发货的将于次日安排发货。
5、请办理完货款后,将收据、底单等连同收货人的地址、姓名、等以传真、、短信、等形式通知我们。


运输说明:

1、极低温产品:极低温产品运输过程中加装干冰运输。用干冰把产品包裹起来,再用泡沫盒密封,胶带层层粘住泡沫盒,放入索莱宝的箱子,然后交付给合作快递,安全快速高效放心的送客户的手中,保证产品的性质稳定如一,为您的实验保驾护航。
2、低温产品:低温产品运输过程中加装索莱宝冰袋运输。事先用冰袋把产品包裹起来,再使用泡沫盒密封,用胶带严实密封泡沫盒,再放入索莱宝的箱子(保温效果少可以持续一周),然后交付给合作快递,安全快速高效放心的送客户的手中,保证产品的性质稳定如一,为您的实验保驾护航。
3、常温产品:常温产品运输过程中无需加冰或者特殊包装。产品由公司库房人员快速配货,准确快速高效的快递保证产品快速送达您的手中。

 相关同类产品:

留言框

  • 产品:

  • 您的单位:

  • 您的姓名:

  • 联系电话:

  • 常用邮箱:

  • 省份:

  • 详细地址:

  • 补充说明:

  • 验证码:

    请输入计算结果(填写阿拉伯数字),如:三加四=7

版权所有  ICP备案号: 管理登陆 技术支持:化工仪器网   总流量:579637  网站地图