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产品名称:氧化型谷胱甘肽(GSSG)含量检测试剂盒

产品型号:BC1180

产品报价:

产品特点:氧化型谷胱甘肽(GSSG)含量检测试剂盒
氧化型谷胱甘肽(GSSG)是谷胱甘肽(GSH)的氧化形式,又称为二硫代谷胱甘肽,是两分子的谷胱甘肽氧化而成。

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BC1180氧化型谷胱甘肽(GSSG)含量检测试剂盒的详细资料:

 

产品名称氧化型谷胱甘肽(GSSG)含量检测试剂盒

产品英文名 Oxidized Glutathione(GSSG)Assay Kit

产品货号:BC1180             产地:北京市通州区马驹桥联东U谷8三楼

产品规格:50管/48样           产品商标:solarbio
保存与运输:4℃保存或-20℃保存;            参考价格:320
库存状态:现货                          
关键字:氧化型谷胱甘肽试剂盒|活性检测试剂盒|GSSG含量检测|试剂盒

简要介绍:
氧化型谷胱甘肽(GSSG)是谷胱甘肽(GSH)的氧化形式,又称为二硫代谷胱甘肽,是两分子的谷胱甘肽氧化而成。GSSG会被谷胱甘肽还原酶还原成GSH,因此机体中大多数是以还原型形式存在。测定细胞内GSH和GSSG含量以及GSH/GSSG比值,能够很好地反映细胞所处的氧化还原状态。本试剂盒利用谷胱甘肽能和5,5’-二硫代-双-(2-硝基ben甲酸)(5,5’-dithiobis-2-nitrobenoic acid,DTNB)反应产生2-硝基-5-巯基ben甲酸,2-硝基-5-巯基ben甲酸在波长412nm处具有大光吸收的特点,通过2-乙烯吡dian抑制样品中原有的还原型谷胱甘肽,然后利用谷胱甘肽还原酶将GSSG还原为GSH,借此测定氧化型谷胱甘肽的含量。
 

产品详细描述
产品内容:
试剂:液体1瓶,50ml,4保存。
试剂:液体1支,170μl,4保存。
试剂:液体1瓶 60ml,4保存。
试剂:液体1瓶 8ml,4保存。
试剂:粉剂1支,4保存,用前8ml蒸馏水溶解。溶解后-20分装保存
试剂:液体1支,40μl,用前0.8ml蒸馏水稀释。
标准品:粉剂1支,10mg,4避光保存。
产品说明:
氧化型谷胱甘肽(GSSG)是谷胱甘肽(GSH)的氧化形式,又称为二硫代谷胱甘肽,是两分子的谷胱甘肽氧化而成。GSSG会被谷胱甘肽还原酶还原成GSH,因此机体中大多数是以还原型形式存在。测定细胞内GSH和GSSG含量以及GSH/GSSG比值,能够很好地反映细胞所处的氧化还原状态。本试剂盒利用谷胱甘肽能和5,5’-二硫代-双-(2-硝基ben甲酸)(5,5’-dithiobis-2-nitrobenoic acid,DTNB)反应产生2-硝基-5-巯基ben甲酸,2-硝基-5-巯基ben甲酸在波长412nm处具有大光吸收的特点,通过2-乙烯吡dian抑制样品中原有的还原型谷胱甘肽,然后利用谷胱甘肽还原酶将GSSG还原为GSH,借此测定氧化型谷胱甘肽的含量。
自备仪器和用品: 
分析天平、微量匀浆器(规格2ml)、低温离心机、水浴锅、移液器、可见分光光度计、1ml比色皿。
操作步骤:

  • 样品的处理

(1)组织处理
新鲜组织先用PBS冲洗2次,然后称取动物组织或者植物组织0.1g。加入用试剂润洗过的匀浆器中(匀浆器提前放冰上预冷);然后加入1ml试剂(组织/试剂比例保持不变即可),迅速冰上充分研磨(使用液氮研磨效果更好);10000rpm 4离心10min;取上清液放置于4待测,若暂时不能完成测试可放于-80保存(可保存10天)。
(2)血液处理
血浆:将收集的抗凝血于4,600g离心10分钟,吸取上层血浆到另一支试管中,加入等体积的试剂,4,8000g离心10分钟,将上清移入新的试管中放置于4待测,若暂时不能完成测试可放于-80保存(可保存10天)。
血细胞:将收集的抗凝血于4,600g离心10分钟,弃去上层血浆用3倍体积的PBS清洗3次(用PBS重悬血细胞,600g离心10分钟),加入等体积试剂,混匀后4放置10分钟,8000g离心10分钟,吸取上清放于4待测,若暂时不能完成测试可放于-80保存(可保存10天)。
(3)细胞处理
收集不少于108个细胞,先用PBS清洗细胞2次(PBS重悬细胞,600g离心10分钟),加入3倍细胞沉淀体积的试剂重悬细胞,反复冻融2-3次(可在液氮中冻结,37水浴中溶解),8000g离心10分钟,收集上清于4待测,若暂时不能完成测试可放于-80保存(可保存10天)。
二、实验操作:

  1. 分光光度计预热30min以上,调节波长412nm,蒸馏水调零。
  2. 试剂放置37(哺乳动物)或25(一般物种)水浴中保温30min。
  3. 标准品的稀释:将标准品用1ml蒸馏水溶解(4保存),浓度为10mg/ml。取适当溶液配制浓度为25μg/ml、20μg/ml、12.5μg/ml、6.25μg/ml、3.125μg/ml、0μg/ml的标准品(试剂十倍稀释后进行稀释)。
  4. 1.5ml离心管,加入100μL稀释好的标准品或样品,加入2μL试剂,混匀后37孵育30分钟。
  5. 制作标准曲线

孵育完成后标准管依次加入700μL试剂100 μL试剂100 μL试剂10 μL试剂,迅速混匀后,测定412nm处30 s和150 s光吸收A1和A2。吸光度(A2-A1)为横坐标(x),浓度为纵坐标(y)做标准曲线。

  1. 样品管依次加入700μL试剂100 μL试剂100 μL试剂10 μL试剂,迅速混匀后,测定412nm处30 s和150 s光吸收A1和A2A= A2- A1

三、GSSG含量计算
根据标准曲线,将样品A带入公式中(x),计算出样品浓度y(μg/ml)。
1)按蛋白浓度计算 
GSSG(μg / mg prot=y×V 反总÷V ÷Cpr =y×10.12÷Cpr
2)按样本质量计算 
GSSG(μg /g= y×V 反总÷(V ÷V 样总×W)= y×10.12 ÷W
3)按细胞数量计算 
GSSG(μg /104 cell= y×V 反总÷(V ÷V 样总×细胞数量)= y×10.12 ÷细胞数量 
4)按液体体积计算 
GSSG(μg / mL= y×V 反总÷V = y×10
V 反总:反应总体积,1.012mLV 样总:上清液总体积,1 mLV 样:加入反应体系中上清液体积,100μL=0.1 mLW:样品质量,g Cpr:上清液蛋白质浓度,mg/mL 
注意事项:

  1. 样品处理需匀浆*,若当天不能完成测量,可放-80℃保存。
  2. 若不确定样品中GSSG含量的高低,可稀释几个梯度后再进行测量。
  3. 此方法利用酶促反应速率计算底物浓度,尽量准确在30秒和150秒处完成读数。
  4. 因为试剂一中含有蛋白质沉淀剂,因此上清液不能用于蛋白浓度测定。

相关文献:
《Trimetazidine restores the positive adaptation to exercise training by mitigating statin‐induced skeletal muscle injury》 作者:Ming Song , Fang‐fang Chen , Yi‐hui Li,  Lei Zhang , Feng Wang,  Ran‐ran Qin  ,Zhi‐hao Wang , Ming Zhong , Meng‐xiong Tang , Wei Zhang , Lu Han 期刊:Journal of Cachexia, Sarcopenia and Muscle 影响因子:10.754 PMID:29152896
《Composition Analysis by UPLC-PDA-ESI (?)-HRMS and Antioxidant Activity Using Saccharomyces cerevisiae Model of Herbal Teas and Green Teas from Hainan》 作者: Hua Li, Lanying Wang and Yanping Luo 期刊:molecules 影响因子:3.06 PMID:30301226
《Cell death induced by α-terthienyl via reactive oxygen species-mediated mitochondrial dysfunction and oxidative stress in the midgut of Aedes aegypti larvae》 作者:JieZhangaShakilAhmadaLan-YingWangaQianHanbJian-ChunZhangaYan-PingLuo 期刊:Free Radical Biology and Medicine 影响因子:5.657 PMID:31022448
 

氧化型谷胱甘肽(GSSG)含量检测试剂盒

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