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产品名称:真菌基因组DNA提取试剂盒

产品型号:D2300

产品报价:

产品特点:真菌基因组DNA提取试剂盒
货号:D2300
规格:50T、100T
对于酵母菌和霉菌,可以用玻璃珠处理,而对于大型真菌,可直接用液氮研磨。经过前期处理的菌液,用硅质膜吸附,即可得到高纯度的基因组。提取纯化后的 DNA,可以直接用于 PCR/Real time-PCR,sequencing,Southern blot,mutant analysis,SNP 等下游应用实验。

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D2300真菌基因组DNA提取试剂盒的详细资料:

真菌基因组DNA提取试剂盒
货号:D2300
规格:50T、100T
保存:室温(15℃-25℃) 干燥保存,复检期 12 个月,2℃-8℃保存时间更长 。


产品说明:
    真菌是具有真核和细胞壁的异养生物。种属很多,已报道的属达 1 万以上,种超过 10 万个。真菌通常又分为三类,即酵母菌、霉菌和蕈菌(大型真菌) 。对于酵母菌和霉菌,可以用玻璃珠处理,而对于大型真菌,可直接用液氮研磨。经过前期处理的菌液,用硅质膜吸附,即可得到高纯度的基因组。提取纯化后的 DNA,可以直接用于 PCR/Real time-PCR,sequencing,Southern blot,mutant analysis,SNP 等下游应用实验。


操作步骤:
    使用前请先在漂洗液中加入无水乙醇,加入体积请参照瓶体上的标签。所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。
1、样品的处理:
    1)对于酵母菌,取 1-2ml 培养好的菌液,离心收集,弃上清。加入 200ul 溶液 A,加入 20ul RNase A,再加入 100mg 玻璃珠,在高速振荡器上振荡,约 5-10min。
    2)霉菌(孢子也可相同处理):取 50-100mg 菌丝,加 200ul 溶液 A,用玻璃研磨器适当研磨分散菌丝,加入 20ul RNase A,再加入 100mg 玻璃珠,在高速振荡器上振荡,约 30min。
    3)大型真菌(如蘑菇等) :称取 50-100mg 样品,倒入适量的液氮,立即研磨重复 3 次,使样品研成粉末(如无液氮, 可加 200ul 溶液 A 后用玻璃研磨器适当研磨) , 加 200ul 溶液 A, 加入 20ul RNase A, 再加入 100mg玻璃珠,在高速振荡器上振荡,约 5min。
2、 加入 20ul 10mg/ml 的蛋白酶 K, 充分混匀, 55℃水浴消化, 30min。 消化期间可颠倒离心管混匀数次, 12000rpm离心 2min。将上清转移到一个新的离心管中。如有沉淀,可再次离心。
3、在上清中加入 200ul 溶液 B,充分混匀。如出现白色沉淀,可放 55℃水浴 5min,沉淀即会消失,不影响后续实验。如溶液未变清亮,说明样品消化不*,可能导致提取的 DNA 量少及不纯,还有可能导致上柱后堵柱子,请增加消化时间。
4、再加入 200ul 无水乙醇,充分混匀,此时可能会出现絮状沉淀,不影响 DNA 的提取,将溶液和絮状沉淀都加入吸附柱中,放置 2 分钟。
5、12000rpm 离心 1min,弃废液,将吸附柱放入收集管中。
6、向吸附柱中加入 700ul 漂洗液(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),12000rpm 离心 1min,弃废液,将吸附柱放入收集管中。
7、向吸附柱中加入 500ul 漂洗液,12000rpm 离心 1min,弃废液,将吸附柱放入收集管中。
8、12000rpm 离心 2min,将吸附柱置于室温或 50℃温箱放置数分钟,目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除,否则漂洗液中的乙醇会影响后续的实验如酶切、PCR 等。
9、将吸附柱放入一个干净的离心管中,向吸附膜中央悬空滴加 50-200ul 经 65℃水浴预热的洗脱液,室温放置5min,12000rpm 离心 1min。
10、离心所得洗脱液再加入吸附柱中,室温放置 2min,12000rpm 离心 2min,即可得到高质量的基因组DNA。


注意事项:

1. 由于真菌种类万千,对于一些特别难处理的真菌,可用液氮研磨,再用玻璃珠振荡,蛋白酶K处理,一般都可以得到一定量的基因组DNA,如电泳检测很弱,一般PCR都会有较好结果。
2. 若溶液A或溶液B中有沉淀,可在 55℃水浴中重新溶解。
3. 如果DNA提取量很少,可加长玻璃珠处理时间,如果提取DNA成弥散短条带,可减少玻璃珠处理时间。
4. 洗脱缓冲液的体积好不少于 50ul,体积过小会影响回收效率;洗脱液的pH值对洗脱效率也有影响,若需要用水做洗脱液应保证其pH值在 8.0 左右(可用NaOH将水的pH值调此范围),pH值低于 7.0 会降低洗脱效率;DNA产物应保存在-20℃,以防DNA降解。
5. DNA浓度及纯度检测:得到的基因组DNA片段的大小与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。回收得到的DNA片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。DNA应在OD 260 处有显著吸收峰,OD 260 值为 1 相当于大约 50 μg/ml双链DNA、40 μg/ml单链DNA。OD 260/ OD 280 比值应为 1.7-1.9,如果洗脱时不使用洗脱缓冲液,而使用去离子水,比值会偏低,因为pH值和离子存在会影响光吸收值,但并不表示纯度低。
6. 在确保样品无误的情况下,如经过多次试验,都无法提出DNA,请将部分样品寄我公司,我们代为摸索优化条件,以使您的实验能够正常进行下去。


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真菌基因组DNA提取试剂盒订购说明:

1、绝大部分产品备有现货,一般情况下都能订货当日发货。 
2、部分非常用产品,需提前1-2日预订,海外期货则需要提前3-6周预订。 
3、部分产品价格会因货期、批次等因素发生变化,若有变动以订货当日新价格为准。 
4、每日订单截止时间为16点整,部分城市可到17点整,因超过截止时间造成当日不能发货的将于次日安排发货。
5、请办理完货款后,将收据、底单等连同收货人的地址、姓名、等以传真、、短信、等形式通知我们。


运输说明:

1、极低温产品:极低温产品运输过程中加装干冰运输。用干冰把产品包裹起来,再用泡沫盒密封,胶带层层粘住泡沫盒,放入索莱宝的箱子,然后交付给合作快递,安全快速高效放心的送客户的手中,保证产品的性质稳定如一,为您的实验保驾护航。
2、低温产品:低温产品运输过程中加装索莱宝冰袋运输。事先用冰袋把产品包裹起来,再使用泡沫盒密封,用胶带严实密封泡沫盒,再放入索莱宝的箱子(保温效果少可以持续一周),然后交付给合作快递,安全快速高效放心的送客户的手中,保证产品的性质稳定如一,为您的实验保驾护航。
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