1M Hepes（pH7.2-7.4）

 HEPES缓冲液是细胞培养实验中经常用到的缓冲液。在开放式的培养条件中，加入HEPES缓冲液，可防止培养基内pH氧化升高，从而将PH维持在7.0左右。那么，HEPES缓冲液的配制步骤和方法是怎样的，下面就给大家详细介绍。
HEPES分子量为238.31，分子式: C8H18N2O4S。
HEPES常用于生物缓冲剂，pH值缓冲范围：6.8-8.2，用在生化诊断试剂盒、DNA/rna提取试剂盒及PCR诊断试剂盒里。对细胞无毒性作用。它是一种氢离子缓冲剂，能较长时间控制恒定的pH范围。使用终浓度为10-50mmol/L。
关于HEPES 缓冲溶液的配制，不同的文献资料有不同的说法。根据用途，一种是单纯的HEPES+NaOH，另一种是HEPES+盐。各种配制方法总结如下：
一、500ml 1 M HEPES, pH = 7.0 Stock solution的配制
119.15 g HEPES 溶解在400ml蒸馏水中，加0.5~1M 的NaOH水溶液调节少所需pH(HEPES的有效pH 范围是6.8~8.2)，然后用蒸馏水定容500ml，于4摄氏度保存。
二、加少量盐的HEPES Buffer配方(500ml)
HEPES 6.5g、NaCl 8.0g、Na2HPO4.7H2O 0.198g、用0.5M NaOH 水溶液调节pH值，后定容。
三、2×HEPES缓冲盐溶液的配制
将1.6g NaCl、0.074g KCl、0.027g Na2HPO4.2H2O、0.2g葡聚糖(glucan or dextran)和1g HEPES溶解在90ml的蒸馏水，用0.5M NaOH调节所需pH值，再用蒸馏水定容100ml即可。

用途：对细胞无毒性作用。它是一种氢离子缓冲剂，能较长时间控制恒定的pH范围。使用终浓度为10-50mmol/L，一般培养液内含20mmol/LHEPES即可达到缓冲能力。

细胞培养常用10mmol/L。

1M Hepes（pH7.2-7.4）

10mmol/L HEPES缓冲液配制方法如下：准确称取HEPES 2.383g，加入新鲜三蒸水定容1L。过滤除菌，分装后4℃保存。如果用于加入细胞培养液中作缓冲剂，建议培养液避光保存，因为有研究报道培养液中的HEPES在可见光下暴露3h以上将产生对细胞有毒性的过氧化氢。

HEPES 即羟乙基呱嗪乙硫磺酸（N’-a-hydroxythylpiperazine-N’-ethanesulfanic acid ）是一种氢离子缓冲剂，能较长时间控制恒定的 pH 范围。有效缓冲范围为 pH6.8-8.2。常用于配制蛋白提取缓冲液、细胞培养用缓冲液等。

HEPES 用于细胞培养时使用终浓度为 10-25mM， 在开放式培养或细胞观察时能维持较恒定的 PH 值。索莱宝生产的 HEPES 缓冲液均经过无菌处理，可直接用于细胞培养。4℃保存可延长产品保质期，长期不用建议低温保存。

参考文献：

《miR‐377‐5p inhibits lung cancer cell proliferation, invasion, and cell cycle progression by targeting AKT1 signaling》 作者:Han Wu, HaiYan Liu, WenJie Liu, YongLi Shi, Dawei Bao 期刊:Journal of Cellular Biochemistry 影响因子:3.448 PMID:30485528

《Traditional Herbal Medicine-Derived Sulforaphene LFS-01 Reverses Colitis in Mice by Selectively Altering the Gut Microbiota and Promoting Intestinal Gamma-Delta T Cells》 作者:Ming Li, Jiali Gao, Yan Tang, Meishuo Liu, Sijin Wu, Kunli Qu, Xiangyu Long, Huajun Li, Min Li, Yinhui Liu, Jieli Yuan, Lei Mao, Yu Liu, Xiliang Zheng, Erkang Wang, Jin Wang and Yongliang Yang 期刊:Frontiers in Spotlight 影响因子:4.259 PMID:29375374
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