丙酮酸羧化酶（PC）检测试剂盒

操作步骤：

一、 样本的前处理组织、细菌或细胞中胞浆蛋白与线粒体蛋白的分离： 1、 称取约0.1g 组织或收集500 万细菌或细胞，加入1mL 提取液，用冰浴匀浆器或研钵匀浆。 2、 将匀浆600g，4℃离心5min。 3、 弃沉淀，将上清液移另一离心管中，11000g，4℃离心10min。 4、 上清液即胞浆提取物，可用于测定从线粒体泄漏的PC（此步可选做）。 5、 在步骤④的沉淀中加入1mL 提取液，超声波破碎（冰浴，功率20％或200W，超声3秒，间隔10 秒，重复30 次），用于线粒体PC 活性测定。

二、测定步骤 1、 分光光度计预热30min 以上，调节波长340nm，蒸馏水调零。

2、 工作液的配制：临用前将试剂二和试剂三转移到试剂一中混合溶解待用；置于37℃(哺乳动物) 或25℃(其它物种)预热5 分钟；用不完的试剂4℃保存一周；试剂四的配制：在试剂四瓶中加入2.5mL 蒸馏水充分溶解待用；用不完的试剂4℃保存一周；

3、 在1mL 石英比色皿中加入50μL 样本、50μL 试剂四和900μL 工作液，立即混匀，记录340nm 处初始吸光值A1 和 2min 后的吸光值A2，计算A=A1-A2。注意：在该试剂盒中，若ΔA 大于0.5，需将样本用提取液稀释适当倍数后测定，使ΔA 小于0.5 可提高检测灵敏度。计算公式中乘以相应稀释倍数。

丙酮酸羧化酶（PC）检测试剂盒

PC 活性计算：（1） 按样本蛋白浓度计算单位定义：每mg 组织蛋白每分钟消耗1nmol NADH 定义为一个酶活力单位。 PC（U/mg prot）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×10 9]÷(V 样×Cpr) ÷T=1608×ΔA÷Cpr （2） 按样本鲜重计算单位定义：每g组织每分钟消耗1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。 PC（U/g 鲜重）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×10 9]÷(W ×V 样÷V 样总)÷T=1608×ΔA÷W （3） 按细菌或细胞密度计算：单位定义：每1 万个细菌或细胞每分钟消耗1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。 PC（U/10 4 cell）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×10 9]÷(500×V 样÷V 样总)÷T=3.215×ΔA V 反总：反应体系总体积，1×10 -3 L；ε：NADH 摩尔消光系数，6.22×10 3 L / mol /cm；d：比色皿光径，1cm；V 样：加入样本体积，0.05 mL；V 样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，2 min； Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500 万。

PC 活性计算：（1） 按样本蛋白浓度计算单位定义：每mg 组织蛋白每分钟消耗1nmol NADH 定义为一个酶活力单位。 PC（U/mg prot）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×10 9]÷(V 样×Cpr) ÷T=1608×ΔA÷Cpr （2） 按样本鲜重计算单位定义：每g组织每分钟消耗1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。 PC（U/g 鲜重）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×10 9]÷(W ×V 样÷V 样总)÷T=1608×ΔA÷W （3） 按细菌或细胞密度计算：单位定义：每1 万个细菌或细胞每分钟消耗1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。 PC（U/10 4 cell）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×10 9]÷(500×V 样÷V 样总)÷T=3.215×ΔA V 反总：反应体系总体积，1×10 -3 L；ε：NADH 摩尔消光系数，6.22×10 3 L / mol /cm；d：比色皿光径，1cm；V 样：加入样本体积，0.05 mL；V 样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，2 min； Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500 万。

相关文献：

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 期刊:Planta 影响因子:3.06 PMID:
《lncRNA Ftx promotes aerobic glycolysis and tumor progression through the PPARγ pathway in hepatocellular carcinoma》 作者:Xiao Li, Qi Zhao, Jianni Qi, Wenwen Wang ,Di Zhang ,Zhen Li, Chengyong Qin 期刊:International Journal of Oncology 影响因子:3.571 PMID:29845188