Solarbio 通用RT-PCR试剂盒（M-MLV）

操作步骤：

一、反转录反应

1、在冰浴的无 RNase 的离心管中加入如下反应成分： 1-5ug 总 RNA 或 50-500ng mRNA 2ul Oligo(dT)16或 2 pmole 基因特异性引物补 RNase-free ddH2O 14.5ul

2、70℃保温 5min 后迅速在冰上冷却 2min，简短离心收集反应液后加入以下各组分： 4ul 5×M-MLV Buffer 1ul dNTPs 0.5ul RNasin 1ul M-MLV

3、42℃温浴 60min，如果是用随机引物，请先将离心管置 25℃温浴 10min，再 42℃温浴 60min。

4、95℃加热 5min 终止反应，置冰上进行后续实验或-20℃保存。

5、用 RNase-free ddH2O 将反应体系稀释到 50ul，取 2-5ul 进行 PCR 反应。

二、PCR 反应

1、按以下各组分配制 50ul PCR 反应体系： 10×PCR Buffer 5ul dNTPs 1ul 上游引物（用户自备 10um） 1ul 下游引物（用户自备 10um） 1ul RT 反应产物 2ul Taq Polymerase 0.5ul ddH2O x ul Total Volume 50ul

2、混匀后短暂离心，PCR 仪扩增，琼脂糖凝胶电泳观察结果。

注意事项：

1、 用于 cDNA 合成反应的相关试剂和耗材尽可能用 DEPC 进行处理，并在高压灭菌后使用。有些试剂不能高压灭菌时，先用经过灭菌的器具、水等配制溶液后，再将溶液进行过滤除菌处理。

2、 试剂盒的各组分应在-20℃保存，避免反复冻融，有效期 12 个月。

3、 RNA 样品要避免反复多次冻融，应使 RNA 在冰浴中处于融化状态。

Solarbio 通用RT-PCR试剂盒（M-MLV）

产品简介：本试剂盒适用于各种 RNA 制品的反转录反应以及随后的 PCR 扩增。它采用 M-MLV 进行反转录反应，能够获得较长的反转录产物。同时，在 20ul 反转录体系和 50ul PCR 反应体系中，还可以一次性得到足够量的 PCR 产物用于后续的克隆实验。本试剂盒中配置的酶均为进口的酶。RT 酶采用进口的 M-MLV，所以 cDNA 更长，基因的信息保留得更完整！反转录过程中特异的 RNase 抑制剂可有效降低由于外源 RNase 污染而导致实验失败的风险。本试剂盒使用方便、快捷，可广泛用于 cDNA 克隆及目的基因检测等分子生物学实验。