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产品名称:辅酶ⅠNAD(H)含量检测试剂盒

产品型号:BC0310

产品报价:

产品特点:辅酶ⅠNAD(H)含量检测试剂盒
测定原理:分别用酸性和碱性提取液提取样品中NAD+和NADH,NADH通过PMS的递氢作用,还原氧化型噻唑蓝(MTT)为甲瓒,在570nm下检测吸光值;而NAD+可被乙醇脱氢酶还原为NADH,进一步采用MTT还原法检测。

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BC0310辅酶ⅠNAD(H)含量检测试剂盒的详细资料:

 

产品名称:辅酶ⅠNAD(H)含量检测试剂盒

产品英文名: CoenzymeⅠNAD(H) Content Assay Kit

产品货号:BC0310           产地:北京市通州区马驹桥联东U谷8三楼

产品规格:50管/24样         产品商标:solarbio
保存与运输:4保存或-20保存;            参考价格:640
库存状态:现货                          
关键字:辅酶ⅠNAD(H)试剂盒|含量检测试剂盒|辅酶ⅠNAD(H)含量检测| 

简要介绍:
辅酶ⅠNAD(H)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,NAD+是糖酵解(EMP)和三羧酸循环(TCA)的主要氢受体,生成的NADH经呼吸电子链(ETC)传递把电子交给氧,在合成ATP的同时,形成大量的ROS,同时NADH再生为NAD+。糖、脂、蛋白质三大代谢物质分解中的氧化反应绝大部分通过这一体系完成。NAD(H)含量和NADH/NAD+比值的高低可用于评价糖酵解和TCA循环的强弱。较高的NAD(H)及NADH/NAD+比值说明细胞呼吸耗氧量较高,处于过氧化状态。此外,NADH/NAD+比值升高也可抑制糖酵解和TCA循环。另外,NAD+降解产物对细胞信号传导、代谢和基因表达等具有重要的调控作用。

产品详细描述

商品货号:商品品牌:规格基本售价:选择规格
BC0310-50管/24样Solarbio50管/24样640.00元


产品内容: 
酸性提取液:15mL×1 瓶,4℃保存;
碱性提取液:15mL×1 瓶,4℃保存;
试剂一:液体 20mL×1 瓶,4℃保存;
试剂二:液体 6mL×1 瓶,4℃保存
试剂三:粉剂×1 瓶,-20℃保存,用时加入 6.1mL 双蒸水,混匀,4℃保存一周;
试剂四:粉剂×1 瓶,4 ℃保存,用时加入 6.6mL 双蒸水,混匀,4℃保存一周;
试剂五:液体 3mL×1 瓶,4 ℃保存;
试剂六:液体 40mL×1 瓶,4 ℃保存;
试剂七:自备,将 72mL 乙醇和 3mL 蒸馏水充分混合备用。
NAD 标准品:粉剂×1 支,-20℃保存。临用前加入 1.5mL 蒸馏水,即 2umol/mL,将其稀释为 1.25nmol/mL 的 NAD 标准溶液备用。
NADH 标准品:粉剂×1 支,-20℃保存。临用前加入 1.4mL 蒸馏水,即 2umol/mL,将其稀释为 1.25nmol/mL 的 NAD 标准溶液备用。

操作步骤:
一、NAD+和 NADH 的提取:
1、血清(浆)中 NAD+和 NADH 的提取:
NAD+的提取:取 0.1mL 血清(浆),加入 0.5mL 酸性提取液,煮沸 5min (盖紧,以防止水分 散失),冰浴冷却后,10000g 4℃离心 10min;取上清 200uL,加入等体积碱性提取液;混匀,10000g 4℃离心 10min,取上清,冰上保存待测。
NADH 的提取:取 0.1mL 血清(浆),加入 0.5mL 碱性提取液,煮沸 5min(盖紧,以防止水分 散失),冰浴冷却后,10000g 4℃离心 10min,取上清 200uL,加入等体积酸性提取液;混匀,10000g 4℃离心 10min,取上清,冰上保存待测。
2、组织中 NAD+和 NADH 的提取:
NAD+的提取:称取约 0.1g 组织,加入 0.5mL 酸性提取液,冰浴研磨,煮沸 5min(盖紧,以防 止水分散失),冰浴冷却后,10000g 4℃离心 10min,取上清 200uL,加入等体积碱性提取液混匀, 10000g 4℃离心 10min,取上清,冰上保存待测。
NADH 的提取:称取约 0.1g 组织,加入 0.5mL 碱性提取液,冰浴研磨,煮沸 5min(盖紧,以防 止水分散失),冰浴冷却后,10000g 4℃离心 10min,取上清 200uL,加入等体积酸性提取液混匀, 10000g 4℃离心 10min,取上清,冰上保存待测。
3、细胞或细菌中 NAD+和 NADH 的提取:
NAD+的提取:收集 500 万细胞或细菌,加入 0.5mL 酸性提取液,超声波破碎 1min(强度 20% 或 200W,超声 2s,停 1s),煮沸 5min(盖紧,以防止水分散失),冰浴中冷却后,10000g 4 ℃离心 10min,取上清液 200uL 另一新的离心管中,加入等体积的碱性提取液使之中和,混匀,10000g 4℃ 离心 10min,取上清,冰上保存待测。
NADH 的提取:收集 500 万细胞或细菌,加入 0.5mL 碱性提取液,超声波破碎 1min(强度 20% 或 200W,超声 2s,停 1s),煮沸 5min(盖紧,以防止水分散失),冰浴中冷却后,10000g 4 ℃离心 10min,取上清液 200uL 另一新的离心管中,加入等体积的酸性提取液使之中和,混匀,10000g 4℃ 离心 10min,取上清,冰上保存待测。

二、测定步骤:
1、 分光光度计预热30分钟以上,调节波长570nm,蒸馏水调零。
2、 操作表(在1.5ml棕色EP管中按下表依次加样)

试剂名称对照管(µL)测定管(µL)NAD 或 NADH 标准管空白管
上清液5050  
标准溶液  50 
蒸馏水   50
试剂六500   
试剂一250250250250
试剂二75757575
试剂三75757575
试剂四75757575
试剂五35353535
充分混匀,室温避光静置20min
试剂六 500500500
充分混匀,静置5min后,15000rpm,25℃离心15min,弃上清,沉淀中加入:
试剂七1000100010001000

混匀, 570nm 下比色,读取吸光值ΔA 测定=A 测定管-A 对照管,NAD 标准管的记为ΔA 标准 1=A 标准管 1-A 空白管。 NADH 标准管的记为ΔA 标准 2=A 标准管 2-A 空白管。空白管只需做一 到两次。

注意事项:
1、操作过程应避光。不可将试剂一、二、三和四混合后再加,必须分开加。
2、反应过程要注意避光。
3、当吸光值大于 1 时,建议稀释后测量,计算公式中应当乘以稀释倍数。

NAD+含量的计算 

  1. 血清(浆)中 NAD+含量计算

NAD+含量(nmol/mL)=ΔA 测定÷(ΔA 标准 1÷C 标)×V 提取÷V 血清=12.5×ΔA 测定÷ΔA 标准 1
2、组织、细菌、细胞中 NAD+含量计算
 (1)按样本蛋白浓度计算
NAD+ (nmol/mg prot)=ΔA 测定÷(ΔA 标准 1÷C 标)×V 提取÷(V 提取×Cpr) = 1.25×ΔA 测定÷ΔA 标准 1
 (2)按样本鲜重计算
NAD+ (nmol/g 鲜重)=ΔA 测定÷(ΔA 标准 1÷C 标)×V 提取÷W= 1.25×ΔA 测定÷ΔA 标准 1÷W
 (3)按细菌或细胞密度计算
NAD+ (nmol/10 4cell)=ΔA 测定÷(ΔA 标准 1÷C 标)×V 提取÷500=0.0025×ΔA 测定÷ΔA 标准 1

 NADH 含量的计算

  1. 血清(浆)中 NADH 含量计算

NADH 含量(nmol/mL)=ΔA 测定÷(ΔA 标准 2÷C 标)×V 提取÷V 血清 =12.5×ΔA 测定÷ΔA 标准 2
2、组织中 NADH 含量计算
(1)按样本蛋白浓度计算
NADH (nmol/mg prot)=ΔA 测定÷(ΔA 标准 2÷C 标)×V 提取÷(V 样品×Cpr) = 1.25×ΔA 测定÷ΔA 标准 2
(2)按样本鲜重计算
NADH (nmol/g 鲜重)=ΔA 测定÷(ΔA 标准 2÷C 标)×V 提取÷W=1.25×ΔA 测定÷ΔA 标准 2÷W
(3)按细菌或细胞密度计算
NADH (nmol/10 4cell)=ΔA 测定÷(ΔA 标准 2÷C 标)×V 提取÷500=0.0025×ΔA 测定÷ΔA 标准 2 C 标:NAD 或 NADH 标准溶液的浓度,1.25nmol/mL;V 提取:加入提取液总体积,1mL;V 血清:提取时加入的血清体积,0.1mL;W:样本鲜重,g;500:500 万个细胞。

辅酶ⅠNAD(H)含量检测试剂盒

 

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