产品名称:α-淀粉酶活性检测试剂盒
产品型号:BC0615
产品特点:α-淀粉酶活性检测试剂盒测定意义:淀粉水解酶,包括α-淀粉酶和β-淀粉酶。α-AL (EC 3.2.1.1)随机催化淀粉中α-1,4-糖苷键水解,生成葡萄糖、麦芽糖、麦芽三糖、糊精等还原糖,同时使淀粉的粘度降低,因此又称为液化酶。
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α-淀粉酶活性检测试剂盒
产品规格:100管/48样 产品商标:solarbio
保存与运输:4℃保存或-20℃保存; 参考价格:860
库存状态:现货
关键字: α-淀粉酶检测试剂盒|淀粉酶检测试剂盒|α-淀粉酶|试剂盒
简要介绍:
淀粉酶负责水解淀粉,包括α-淀粉酶和β-淀粉酶。α-淀粉酶(EC 3.2.1.1)可随机地作用于淀粉中的α-1,4-糖苷键,生成葡萄糖、麦芽糖、麦芽三糖、糊精等还原糖,同时使淀粉的粘度降低,因此又称为液化酶。
还原糖还原3,5-二硝基水杨酸生成棕红色物质。β-淀粉酶不耐热,在70℃钝化15min,从而测定α-淀粉酶活性。
产品详细描述
产品内容:
试剂一:液体20mL×1瓶,室温保存。若有黄色晶体析出,可适当加热溶解后再用。
试剂二:粉剂×1瓶,4℃保存。临用前加入10mL蒸馏水,置于常温水中并加热煮沸,期间不断搅拌粉剂溶解。
标准品:粉剂×1支,10mg无水葡萄糖。
产品说明:
淀粉酶负责水解淀粉,包括α-淀粉酶和β-淀粉酶。α-淀粉酶(EC 3.2.1.1)可随机地作用于淀粉中的α-1,4-糖苷键,生成葡萄糖、麦芽糖、麦芽三糖、糊精等还原糖,同时使淀粉的粘度降低,因此又称为液化酶。
淀粉水解酶催化淀粉水解生成还原糖,还原糖还原3,5-二硝基水杨酸生成棕红色物质,在540 nm有吸收峰;通过测定540 nm吸光度增加速率,计算淀粉酶活性。α-AL耐热,但是β-淀粉酶可在70℃钝化15min。因此粗酶液经过70℃钝化15min,就只有α-AL能够催化淀粉水解。
需自备的仪器和用品:
酶标仪或分光光度计、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、96孔板/微量比色皿、研钵和蒸馏水。
操作步骤:
一、粗酶液提取:
称取约0.1g样本,加0.8mL蒸馏水匀浆;匀浆后在室温下放置提取15min,每隔5min振荡1次,使其充分提取;6000g,常温离心10min,吸取上清液并加蒸馏水定容10 mL,摇匀,即为淀粉酶原液。
二、测定步骤和加样表:
试剂(μL) | 对照管 | 测定管 | 标准管 | 空白管 | |
α淀粉酶原液 | 75 | 75 | - | - | |
蒸馏水 | - | - | - | 75 | |
标准溶液(mg/mL) | - | - | 75 | - | |
70℃水浴15min左右,冷却 | |||||
试剂一 | 150 | - | - | - | |
将以上对照管、测定管和试剂二置于40℃恒温水浴中保温10min左右 | |||||
试剂二 | 75 | 75 | 75 | 75 | |
在40℃恒温水浴中准确保温5min | |||||
试剂一 | - | 150 | 150 | 150 |
混匀,90℃水浴10min,蒸馏水调零,540nm处读取对照管、测定管、标准管、空白管吸光度,分别记为A对照、A测定、A标准和A空白,计算ΔA测定=A测定-A对照,ΔA标准=A标准-A空白。
三、α-淀粉酶活性计算:
以ΔA标准为y轴,以标准溶液浓度为x轴,绘制标准曲线,得到方程y=kx+b。将
ΔA测定带入方程得到x(mg/mL)。
2、α淀粉酶活性的计算
(1)按照样本质量计算
单位定义:每g 组织每分钟催化产生1mg 还原糖定义为1 个酶活力单位。
α- 淀粉酶活性(mg/min/g 鲜重)=x×V 样÷(W×V 样÷V 样总)÷T=2×x÷W
(2)按照蛋白质含量计算
单位定义:每mg 组织蛋白每分钟催化产生1mg 还原糖定义为1 个酶活性单位。
α-淀粉酶活性(mg/min/mg prot)= x×V 样÷(V 样×Cpr)÷T==0.2×x÷Cpr
(3)血清(浆)样本中α-淀粉酶活性计算
单位定义:每ml血清(浆)每分钟催化产生1mg 还原糖定义为1 个酶活性单位。
α-淀粉酶活性(mg/ml)= x÷T=0.2×x
V 样:加入反应体系中样本体积,0.25 mL;V 样总:提取液总体积,10 mL;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;T:反应时间,5min。
注意事项:
当测定的吸光值大于1时,可以对样本进行适当稀释后测定。
相关文献:
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《Alternative splicing and translation play important roles in hypoxic germination in rice》 作者:Mo-Xian Chen, Fu-Yuan Zhu, Feng-Zhu Wang, Neng-Hui Ye, Bei Gao, Xi Chen, Shan-Shan Zhao, Tao Fan, Yun-Ying Cao, Tie-Yuan Liu, Ze-Zhuo Su, Li-Juan Xie, Qi-Juan Hu, Hui-Jie Wu, Shi Xiao, Jianhua Zhang, Ying-Gao Liu 期刊:Journal of Experimental Botany 影响因子:5.36 PMID:30535157
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