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产品名称:基因组提取试剂盒 质粒提取试剂盒

产品型号:D6942

产品报价:

产品特点:基因组提取试剂盒 质粒提取试剂盒
货号:D6942
规格:100T
质粒(Plasmid)是一种染色体外的稳定遗传因子,大小从1-200kb不等,为双链、闭环的DNA分子,并以超螺旋状态存在于宿主细胞中。质粒主要存在于细菌、放线菌和真菌细胞中,它具有自主复制和转录能力,能在子代细胞中保持恒定的拷贝数,并表达所携带的遗传信息。

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D6942基因组提取试剂盒 质粒提取试剂盒的详细资料:

基因组提取试剂盒 质粒提取试剂盒
货号:D6942
规格:100T


产品说明:
    质粒(Plasmid)是一种染色体外的稳定遗传因子,大小从1-200kb不等,为双链、闭环的DNA分子,并以超螺旋状态存在于宿主细胞中。质粒主要存在于细菌、放线菌和真菌细胞中,它具有自主复制和转录能力,能在子代细胞中保持恒定的拷贝数,并表达所携带的遗传信息。


质粒提取原理及流程:
    较常用的质粒DNA提取方法有3种:碱裂解法、煮沸法和去污剂(如Triton和SDS)裂解法。前两种方法比较剧烈,适用于较小的质粒(<15kb)。去污剂裂解法则比较温和,一般用于分离大质粒(>15kb)。碱裂解法是一种应用为广泛的制备质粒DNA的方法,其原理为:染色体DNA比质粒DNA分子大得多,且染色体DNA为线状分子,而质粒DNA为共价闭合环状分子;当用碱处理DNA溶液时,线状染色体DNA容易发生变性,共价闭环的质粒DNA在回到中性即恢复其天然构象;变性染色体DNA片段与变性蛋白质和细胞碎片结合形成沉淀,而复性的超螺旋质粒DNA分子则以溶解状态存在液相中,离心去除沉淀后,就可从上清中回收质粒DNA。目前,市面上质粒提取试剂盒大多数都是采取上述的碱裂解方法,不同之处在于纯化方式。目前比较常用的纯化系统是硅基质吸附材料,其原理为在高盐环境下质粒DNA能够结合到硅基质上,然后用低盐缓冲液或水将质粒DNA从硅基质上洗脱下来。得到的质粒可以用于酶切、PCR、测序、细菌转化、转染等分子生物学实验。


质粒鉴定与评价:
琼脂糖电泳检测
    碱裂解法提取的质粒经琼脂糖电泳进行鉴定时,理想状况是只出现超螺旋—条带,但在质粒提取过程中,由于机械力、酸碱度、试剂等原因,使质粒DNA链发生断裂,可能出现两条带或者出现三条带,这三条带电泳迁移率从快到慢,分别是超螺旋、开环和复制中间体(即没有复制*的两个质粒粘连在—起)。如果加溶液Ⅱ后过度振荡,会在远离这三条带的位置出现条带,这条带泳动得较慢,是大肠杆菌基因组DNA的片断。非常偶然的是,有时候提取的质粒会出现4个以上的条带,这是由于特殊的DNA序列导致了不同程度的超螺旋(超螺旋的圈数不同)所致。但是,只要质粒经单酶切鉴定后,只有单一条带,就证明没有基因组的污染。酶切检测质粒提取后,为了进—步鉴定质粒的正确与否,就要进行酶切鉴定,通过与Marker对比,确定质粒的分子量大小。用紫外线分光光度计检测浓度测定标准为:OD 260 值为1相当于大约50ug/ml双链DNA。OD 260 /OD 280 比值1.7-1.9之间说明所得DNA纯度较好。OD 260 /OD 280 比值若低于1.7说明可能有蛋白污染。OD 260 /OD 280 比值若高于2.0则说明DNA有可能已降解。如果洗脱时不使用洗脱缓冲液,而使用去离子水,比值会偏低,因为pH值和离子浓度会影响光吸收值,但并不表示纯度低。

 

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