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产品名称:基因工程产品 IPTG

产品型号:I8070

产品报价:

产品特点:基因工程产品 IPTG
货号:I8070
规格:1g/5g/100g
分子式:C9H18O5S
分子量:238.31
储存条件:2-8℃
纯度:≥99.0%
外观(性状):白色结晶性粉末
单位:瓶

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I8070基因工程产品 IPTG的详细资料:

基因工程产品 IPTG
货号:I8070
规格:1g/5g/100g

  • 英文名称:IPTG(Isopropyl β-D- Thiogalactopyranoside )
  • 别名:Isopropyl-β-D-Thiogalactoside;IPTG
  • CAS:367-93-1
  • 分子式:C9H18O5S
  • 分子量:238.31
  • 储存条件:2-8℃
  • 纯度:≥99.0%
  • 外观(性状):白色结晶性粉末
  • 单位:瓶

异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)是一种作用*的诱导剂,不被细菌代谢而十分稳定,因此被实验室广泛应用。当有乳糖存在时,lac操纵子(元)即可被诱导。在这个操纵子(元)体系中,真正的诱导剂并非乳糖本身。乳糖进入细胞,经b-半乳糖苷酶催化,转变为半乳糖。后者作为一种诱导剂分子结合阻遏蛋白,使蛋白构象变化,导致阻遏蛋白与O序列解离、发生转录。
实验方案
1、外源基因的诱导表达
( 1 )用适当的限制性内切核酸酶消化载体DNA 和目的基因。
( 2 )按连接步骤连接目的基因和载体,并转化到相应的宿主菌。
( 3 )筛选出含重组子的转化菌落,提取质粒DNA 作限制性内切核酸酶图谱,DNA 序列测定确定无误后进行下一步。
( 4 )如果表达载体的原核启动子为PL 启动子,则在30 -32 ℃ 培养数小时,使培养液的OD600达0.4-0.6 ,迅速使温度升42 ℃ 继续培养3 -5h ;如果表达载体的原核启动子为tac 等,则37 ℃培养细菌数小时达到对数生长期后加IPTG 终浓度为1 mmol / L。继续培养3 -5h 。
( 5 )取上述培养液1 mL , 1000g 离心,1 min ,沉淀,加100 μL 聚丙烯酰胺凝胶电泳上样缓冲液后,作SDS -PAGE 检测。
2、大肠杆菌包涵体的分离与蛋白质纯化
1 )细菌的裂解
常用方法有:① 高温珠磨法;② 高压匀浆;③ 超声破碎法;④ 酶溶法;⑤ 化学渗透等。前三种方法属机械破碎法,并且方法① 、② 已在工业生产中得到应用,后三种方法在实验室研究中应用较为广泛。下面介绍酶溶法和超声破碎法的实验步骤。
(1)酶溶法。常用的溶解酶有溶菌酶;β-1,3 -葡聚糖酶;β-1,6 -葡聚糖酶;蛋白酶;壳多糖酶;糖昔酶等。溶菌酶主要对细菌类有作用,而其他几种酶对酵母作用显著。
主要步骤为:
① 4 ℃ ,5000rpm 离心,15 min ,收集诱导表达的细菌培养液(100 mL )。弃上清,约每克湿菌加3 mL 裂解缓冲液,悬浮沉淀。
注意事项:培养噬菌体时,Top agar中的添加量为:25 μl/3 ml(24 mg/ml)。含有IPTG的培养基4℃避光保存,须在1~2 周内使用。
保存:IPTG要2-8°C冷藏保存,配制好后保存于-20°C,室温可放置一个月。远离热源及氧化剂。

    异丙基-β-D-硫代半乳糖苷,英文名称IPTG。为安慰性诱导物,X-gal为生色底物,二者共同用于蓝白斑筛选。IPTG可诱导载体lac操纵子DNA区段合成β-半乳糖苷酶氨基端片段,该片段可与宿主细胞编码的缺陷型β-半乳糖苷酶实现基因内互补(α互补)。实现α互补的细菌暴露IPTG,铺在含有X-gal生色底物的培养基上,可形成蓝色菌落。外源DNA插入质粒的多克隆位点后可破坏α互补作用,将产生白色菌落。

特性:纯度 :≥99.0% (TLC) 熔点:110-114℃

湿度(%):≤1.0 pH (5%, 水)25℃:5-7

比旋光度 (1%, 水):-34.0--29.0

溶解性:IPTG贮存液,先在8ml蒸馏水中溶解2g,定溶10ml,用0.22um滤器过滤除菌,贮存于-20℃。 

基因工程产品 IPTG

参考文献:

《Engineering an electroactive Escherichia coli for the microbial electrosynthesis of succinate from glucose and CO2》 作者:Zaiqiang Wu,Junsong Wang, Jun Liu, Yan Wang, Changhao Bi, Xueli Zhang 期刊:Microbial Cell Factories 影响因子:4.402 PMID:30691454

《Engineering an electroactive Escherichia coli for the microbial electrosynthesis of succinate by increasing the intracellular FAD pool》 作者:Zaiqiang Wu,Junsong Wang,Xueli Zhang,Changhao Bi 期刊:Biochemical Engineering Journal 影响因子:3.371 PMID:

《Identification of the O-GalNAcylation site(s) on FOXA1 catalyzed by ppGalNAc-T2 enzyme in vitro》 作者:Siqi Zhang,Lijuan,Bai,Qiushi Chen,Yan Ren,Keren Zhang,Qiong Wu,Huang Huang,Wenli Li ,Yan Zhang,Jianing Zhang,Yubo Liu 期刊:Biochemical and Biophysical Research Communications 影响因子:2.705 PMID:31029427

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