基因工程产品 IPTG
货号：I8070
规格：1g/5g/100g

• 英文名称：IPTG(Isopropyl β-D- Thiogalactopyranoside )

• 别名：Isopropyl-β-D-Thiogalactoside；IPTG

• CAS：367-93-1

• 分子式：C9H18O5S

• 分子量：238.31

• 储存条件：2-8℃

• 纯度：≥99.0%

• 外观（性状）：白色结晶性粉末

• 单位：瓶

异丙基硫代半乳糖苷（IPTG）是一种作用*的诱导剂，不被细菌代谢而十分稳定，因此被实验室广泛应用。当有乳糖存在时，lac操纵子（元）即可被诱导。在这个操纵子（元）体系中，真正的诱导剂并非乳糖本身。乳糖进入细胞，经b－半乳糖苷酶催化，转变为半乳糖。后者作为一种诱导剂分子结合阻遏蛋白，使蛋白构象变化，导致阻遏蛋白与O序列解离、发生转录。
实验方案
1、外源基因的诱导表达
( 1 ）用适当的限制性内切核酸酶消化载体DNA 和目的基因。
( 2 ）按连接步骤连接目的基因和载体，并转化到相应的宿主菌。
( 3 ）筛选出含重组子的转化菌落，提取质粒DNA 作限制性内切核酸酶图谱，DNA 序列测定确定无误后进行下一步。
( 4 ）如果表达载体的原核启动子为PL 启动子，则在30 -32 ℃ 培养数小时，使培养液的OD600达0.4-0.6 ，迅速使温度升42 ℃ 继续培养3 -5h ；如果表达载体的原核启动子为tac 等，则37 ℃培养细菌数小时达到对数生长期后加IPTG 终浓度为1 mmol / L。继续培养3 -5h 。
( 5 ）取上述培养液1 mL , 1000g 离心，1 min ，沉淀，加100 μL 聚丙烯酰胺凝胶电泳上样缓冲液后，作SDS -PAGE 检测。
2、大肠杆菌包涵体的分离与蛋白质纯化
1 ）细菌的裂解
常用方法有：① 高温珠磨法；② 高压匀浆；③ 超声破碎法；④ 酶溶法；⑤ 化学渗透等。前三种方法属机械破碎法，并且方法① 、② 已在工业生产中得到应用，后三种方法在实验室研究中应用较为广泛。下面介绍酶溶法和超声破碎法的实验步骤。
（1）酶溶法。常用的溶解酶有溶菌酶；β-1,3 -葡聚糖酶；β-1,6 -葡聚糖酶；蛋白酶；壳多糖酶；糖昔酶等。溶菌酶主要对细菌类有作用，而其他几种酶对酵母作用显著。
主要步骤为：
① 4 ℃ ，5000rpm 离心，15 min ，收集诱导表达的细菌培养液（100 mL ）。弃上清，约每克湿菌加3 mL 裂解缓冲液，悬浮沉淀。
注意事项：培养噬菌体时，Top agar中的添加量为：25 μl/3 ml(24 mg/ml)。含有IPTG的培养基4℃避光保存，须在1~2 周内使用。
保存：IPTG要2-8°C冷藏保存，配制好后保存于-20°C，室温可放置一个月。远离热源及氧化剂。

    异丙基-β-D-硫代半乳糖苷,英文名称IPTG。为安慰性诱导物，X-gal为生色底物，二者共同用于蓝白斑筛选。IPTG可诱导载体lac操纵子DNA区段合成β-半乳糖苷酶氨基端片段，该片段可与宿主细胞编码的缺陷型β-半乳糖苷酶实现基因内互补(α互补)。实现α互补的细菌暴露IPTG，铺在含有X-gal生色底物的培养基上，可形成蓝色菌落。外源DNA插入质粒的多克隆位点后可破坏α互补作用,将产生白色菌落。

特性：纯度 ：≥99.0% (TLC) 熔点：110-114℃

湿度(%)：≤1.0 pH (5%, 水)25℃：5-7

比旋光度 (1%, 水)：-34.0--29.0

溶解性：IPTG贮存液，先在8ml蒸馏水中溶解2g，定溶10ml，用0.22um滤器过滤除菌，贮存于-20℃。 

基因工程产品 IPTG

参考文献：

《Engineering an electroactive Escherichia coli for the microbial electrosynthesis of succinate from glucose and CO2》 作者:Zaiqiang Wu,Junsong Wang, Jun Liu, Yan Wang, Changhao Bi, Xueli Zhang 期刊:Microbial Cell Factories 影响因子:4.402 PMID:30691454

《Engineering an electroactive Escherichia coli for the microbial electrosynthesis of succinate by increasing the intracellular FAD pool》 作者:Zaiqiang Wu,Junsong Wang,Xueli Zhang,Changhao Bi 期刊:Biochemical Engineering Journal 影响因子:3.371 PMID:

《Identification of the O-GalNAcylation site(s) on FOXA1 catalyzed by ppGalNAc-T2 enzyme in vitro》 作者:Siqi Zhang,Lijuan,Bai,Qiushi Chen,Yan Ren,Keren Zhang,Qiong Wu,Huang Huang,Wenli Li ,Yan Zhang,Jianing Zhang,Yubo Liu 期刊:Biochemical and Biophysical Research Communications 影响因子:2.705 PMID:31029427