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产品名称:基因工程试剂 DH5α感受态细胞

产品型号:C1100

产品报价:

产品特点:基因工程试剂 DH5α感受态细胞
货 号:C1100
规 格:10×100ul / 20×100ul
保 存:-70℃保存,运输为干冰包装。自收货之日起液氮保存少一年,-70℃保存少 6 个月。
产品简介:
本公司生产的DH5α感受态细胞是采用大肠杆菌DH5α菌株经特殊工艺制备得到,可用于DNA的化学转化。

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C1100基因工程试剂 DH5α感受态细胞的详细资料:

基因工程试剂 DH5α感受态细胞
货 号:C1100
规 格:10×100ul / 20×100ul
保 存:-70℃保存,运输为干冰包装。自收货之日起液氮保存少一年,-70℃保存少6个月。


产品简介:
    本公司生产的DH5α感受态细胞是采用大肠杆菌DH5α菌株经特殊工艺制备得到,可用于DNA的化学转化。使用pUC19 质粒检测,转化效率可达 10 8 ,-70℃保存 3-5 个月转化效率不发生改变。
    基因型: supE44△lacU169(φ80 lacZ△M15)hsdR17 recA1 end A1 gyrA96 thi-1 relA1
特 点: 一种用于铺制与培养质粒平板和粘粒平板的重组缺陷的抑制型菌株。其 φ80 lacZ△M15 基因的产物可与 pUC 载体编码的 β-半乳糖苷酶氨基端实现 β 互补,可用于蓝白斑筛选。


操作方法:(以下操作均按无菌条件的标准进行)

1、将感受态细胞置于冰上融化,以下实验以 100ul 感受态细胞为例。
2、向感受态细胞悬液中加入需转化的目的 DNA,注意目的 DNA 的体积不要超过感受态细胞悬液体积的十分之一,轻轻旋转离心管以混匀内容物,冰浴放置 30 分钟。
3、将离心管置于 42℃水浴中 60-90 秒,然后快速转移到冰浴中放置 2-3 分钟,注意不要摇动离心管。
4、向离心管中加入 500ul 无菌无抗的 SOC 或 LB 培养基,37℃ 180rpm 振荡培养 1 小时。目的是使质粒上相关的抗性标记基因表达,使菌体复苏。
5、取适量已转化的感受态细胞涂布含相应抗生素的 SOC 或 LB 平板,37℃倒置培养 12-16 小时。涂布用量可根据具体实验来调整,如转化的 DNA 总量较多,可取 100ul 左右的转化产物涂板;反之,如转化的 DNA总量较少,可取 200-300ul 的转化产物涂板。过多菌液可以抑制细菌生长。如果预计的克隆较少,可通过离心后吸除部分培养液,悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。涂布剩余的菌液可 4℃保存,如果次日的转化菌落数过少,可以将剩下的菌液再涂布新的平板。


注意事项:

1、感受态细胞应保存在-70℃,不可反复冻融,否则其转化效率将会降低。
2、实验过程中应严格无菌操作,防止其它 DNA 或杂菌的污染,避免为以后的筛选、鉴定带来影响。
3、转化时,转化效率与外源 DNA 的浓度在一定范围内成正比,但当加入的外源 DNA 量过多或体积过大反而会降低转化效率。转化时 DNA 体积要小于感受态细胞体积的十分之一。
4、转化率的计算:转化率=产生菌落的总数/铺板 DNA 总量。
5、为防止转化实验不成功,可以保留部分连接产物,以重新转化,将损失降到低。


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A1170 氨苄青霉素储存液 (100mg/ml)
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L1015  LB 固体培养基 ( 干粉 )
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相关文献:

《Production of l-alanyl-l-glutamine by immobilized Pichia pastoris GS115 expressing α-amino acid ester acyltransferase》 作者:Yi-Min Li, Jiao-Qi Gao, Xu-Ze Pei, Cong Du, Chao Fan, Wen-Jie Yuan and Feng-Wu Bai 期刊:Microbial Cell Factories 影响因子:4.402 PMID:30711013
 

基因工程试剂 DH5α感受态细胞订购说明:

1、绝大部分产品备有现货,一般情况下都能订货当日发货。 
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