产品简介

北京索莱宝科技有限公司备有微生物培养基类产品谷胱甘肽-琼脂糖凝胶 4B（GST 标签纯化树脂），用于科研试验研究，欢迎咨询订购。 谷胱甘肽-琼脂糖凝胶4B(GST标签纯化树脂)

产品简介：

pGEX载体表达的外源蛋白与谷胱甘肽S-转移酶融合，因此可以通过谷胱甘肽-琼脂糖亲和层析进行纯化。GSTs是一类以谷胱甘肽（γ-谷氨酰半胱氨酰甘氨酸）作为底物，通过形成硫醇尿酸失活毒性小分子的酶。由于GST对底物的亲和力是亚毫摩尔级的，因此谷胱甘肽固化于琼脂糖形成的亲和层析树脂对GST及其融合蛋白的纯化效率很高。可以用含游离谷胱甘肽的缓冲液洗脱结合GST融合蛋白。树脂用3mol/L NaCl的缓冲液再生。 谷胱甘肽琼脂糖对GST融合蛋白的结合能力很强（每毫升柱床体积的树脂能结合8毫克融合蛋白）。

特性: 

粒度：45-165μm 

流速：75cm/h 

工作PH：4-10 

耐压：0.3Mpa 

载量：＞5mg 谷胱甘肽 S-转移酶

使用说明：

谷胱甘肽树脂的处理:

1.轻轻颠倒盛有谷胱甘肽-琼脂糖树脂的容器，将树脂混成匀浆。

2.取部分匀浆放入15mL聚丙烯管（每100mL 细菌培养物大约需要2mL 匀浆）。

3.4℃ 500 g离心5分钟，小心去掉上清。

4.在树脂中加入10倍柱床体积预冷的PBS，颠倒数次混匀，4℃ 500 g离心5分钟，小心去掉上清。

5.每毫升树脂加入1毫升冷的PBS，制成50%匀浆，颠倒数次，混合均匀，悬液冰上放置待用。制备细胞抽提物：

6.每100毫升培养物的细胞沉淀重悬于4mL PBS缓冲液中。

7.加入溶菌酶至终浓度为1mg/mL,冰上放置30分钟。

8.用针筒将10mL 浓度为0.2%的TritonX-100 强行注入黏稠的细胞裂解物中，剧烈振动数次混匀。加入DNase和RNase至终浓度5ug/mL, 4℃振动温育10分钟，4℃ 3000 g离心30分钟，去除不溶性细胞碎片，上清转移到一只新管中，加入DTT至终浓度1mmol/L。纯化融合蛋白：

9.细胞裂解物与适量50%谷胱甘肽-琼脂糖树脂匀浆混和，每100毫升细菌培养物加2mL树脂，于室温轻摇30min。

10.混合物于4℃以500 g离心5分钟，小心去掉上清并留样少许进行SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳。

11.沉淀中加入10倍柱床体积的冷的PBS，颠倒离心管数次混匀，洗去未与树脂结合的蛋白。

12.4℃以500 g离心5分钟，小心去掉上清并留样少许进行SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳。

13.重复步骤11和12两次。

14.结合的GST融合蛋白可用谷胱甘肽洗脱液洗脱，也可用凝血酶、肠激酶或Xa 因子切割，释放靶蛋白。

用谷胱甘肽洗脱融合蛋白：

15.沉淀中加入1倍柱床体积的谷胱甘肽洗脱缓冲液，室温轻轻搅动10min，洗脱树脂上结合的蛋白。

16.4℃以500 g离心5分钟，上清（含洗脱的融合蛋白）移至新管中。

17.重复步骤a和b两次，合并3次上清。蛋白酶解从结合的GST融合蛋白上回收靶蛋白：

18.在结合了融合蛋白的树脂中加入凝血酶、肠激酶或Xa 因子（根据融合蛋白中的位点选择），每mL树脂加入50单位溶于1mLPBS的蛋白酶。颠倒离心管数次混匀，室温下振荡2—16小时。用小规模实验确定精确时间。

19.4℃以500 g离心5分钟，上清小心移至新管中。（GST仍结合在树脂上，而靶蛋白在上清中，蛋白酶也在上清中，仍需要分离）

20.10% SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分析每一步样品的蛋白质组成。试剂配制：谷胱甘肽洗脱缓冲液：10mmol/L还原型谷胱甘肽，50mmol/L Tris-Cl (pH8.0)

  备注：产品信息可能会有优化升级。请以实际标签信息为准。

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标题:Porcine IKK汍 is involved in the STING induced type I IFN antiviral response of the cytosolic DNA signaling pathway

成员:Jia Luo, Qi Cao, Jiajia Zhang, Sen Jiang, Nengwen Xia, Shaohua Sun, Wanglong Zheng, Nanhua Chen, Francois Meurens, Jianzhong Zhu

论文因子:4.8 发表期刊:JOURNAL OF BIOLOGICAL CHEMISTRY pmid:37660925

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标题:OAS1 suppresses African swine fever virus replication by recruiting TRIM21 to degrade viral major capsid protein

成员:Hualin Sun, Mengli Wu, Zhonghui Zhang, Yiwang Wang, Jifei Yang, Zhijie Liu, Guiquan Guan, Jianxun Luo, Hong Yin, Qingli Niu

论文因子:5.4 发表期刊:JOURNAL OF VIROLOGY pmid:37815352

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标题:zma-miR159 targets ZmMYB74 and ZmMYB138 transcription factors to regulate grain size and weight in maize

成员:Wang Qiyue, Wan Jiong, Dang Kuntai, Meng Shujun, Hu Desheng, Lin Yuan, Qiu Xiaoqian, Guo Zhanyong, Fu Zhiyuan, Ding Dong, Tang Jihua

论文因子:7.4 发表期刊:PLANT PHYSIOLOGY pmid:37590954

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标题:A link between STK signalling and capsular polysaccharide synthesis in Streptococcus suis

成员:Tang Jinsheng, Guo Mengru, Chen Min, Xu Bin, Ran Tingting, Wang Weiwu, Ma Zhe, Lin Huixing, Fan Hongjie

论文因子:17.694 发表期刊:Nature Communications pmid:37120581

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标题:Identification of a Putative CFSH Receptor Inhibiting IAG Expression in Crabs

成员:Fang Liu, Lin Huang, An Liu, Qingling Jiang, Huiyang Huang, Haihui Ye

论文因子:5.6 发表期刊:INTERNATIONAL JOURNAL OF MOLECULAR SCIENCES pmid:37569617

注意：以上文献 仅供参考

谷胱甘肽-琼脂糖凝胶4B(GST标签纯化树脂)

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