产品简介

索莱宝科技有限公司备有镍-琼脂糖凝胶，即HIS标签纯化树脂，主要用于科研试验研究，可在线咨询订购相关产品。用于纯化6×His标签重组蛋白的一种纯化介质，它是由6%交联的Sepharose耦连了一种四齿螯合剂NTA而得. 镍-琼脂糖凝胶6FF

Ni-NTA琼脂糖凝胶6FF是用于纯化6×His标签重组蛋白的一种纯化介质，它是由6%交联的Sepharose耦连了一种四齿螯合剂NTA而得. 它可用于在非变性或变性条件下纯化任何表达系统表达的6×His标签重组蛋白。NTA，含有四个螯合区，较一般的三齿螯合剂能更好的结合Ni2+。6×His可与Ni2+螯合，从而使His标签蛋白结合在Ni-NTA纯化介质上，未结合的蛋白被洗涤下去，结合在介质上的蛋白经过一定浓度的咪唑或低pH缓冲液的温和洗脱下来，从而得到高纯度的目的蛋白。该纯化介质与His标签蛋白具有极高的亲和力，可达5-20 mg/ml。可在非变性和变性条件下纯化任何表达系统所得的His标签蛋白。纯化程序简单，所得的蛋白纯度可高达95％。Ni-NTA可再生4-6次，重复使用。本产品悬浮液为20％乙醇，已螯合Ni2+。

操作方法：

A. 非变性条件下抽提His标签蛋白

1) 准备细胞，接种，诱导表达。收集细胞，置于-70°C或立即进行步骤2操作。

2) 加入1/20细胞生长体积的NTA-0 Buffer和PMSF。PMSF使用的工作浓度为1 mM现用现加。

3) 将细胞悬浮起来，加入溶菌酶，混匀，冰上放置30分钟，超声或匀浆破碎细胞。该步骤冰上操作。

4) 加入10% Triton X-100, 使终浓度为0.05%，充分混匀，冰上放置15分钟。

5) 12000 rpm/min(20,000×g以上)，4°C离心15分钟以上。取上清，置于冰上备用或-20°C保存。

6) 将NTA树脂装入合适的层析柱，层析用10倍NTA体积的NTA-0 Buffer洗。

7) 将样品加至NTA层析柱中，流速在15 ml/h左右，收集穿透部分，用SDS/PAGE分析蛋白的结合情况。

8) 层析用5倍NTA体积的NTA-0 Buffer洗，流速控制在30 ml/h左右。

9) 分别用5倍NTA体积的NTA-20、NTA-40、NTA-60、NTA-80、NTA-100、NTA-200、NTA-1000 Buffer洗脱，流速控制在15 ml/h左右，收集洗脱液，每管收集一个NTA体积。

10) 确定目标蛋白质在洗脱液中的分布情况。最为有效的方式是SDS-PAGE分析。也可以用Bradford 蛋白质测定试剂盒，快速确定蛋白质的含量，然后用SDS/PAGE分析蛋白质的分布。

11)纯化的目标蛋白质的保存条件需要根据蛋白质的性质和用途确定。  NTA-0 、20、40、60、80、100、200、1000Buffer分别为浓度20 mM Tris-HCl pH7.9, 0.5 M NaCl, 10% Glycerol，添加0、20、40、60、80、100、200、1000 mM Imidazole。

B.变性条件下从包涵体中纯化His标签蛋白

1) 准备细胞，接种，诱导表达。收集细胞，置于-70°C或立即进行步骤2操作。

2) 加入1/20细胞生长体积的GuNTA-0 Buffer和PMSF。PMSF使用的工作浓度为1 mM现用现加。

3) 将细胞悬浮起来，冰上超声破碎细胞，降低粘稠度。

4) 室温放置30分钟，间或混匀或用磁力搅拌。

5) 12000转/分（20,000×g以上），4°C离心15分钟以上。取上清，置于冰上备用或-20°C保存。

6) 将NTA树脂装入合适的层析柱，层析用10倍NTA体积的GuNTA-0 Buffer洗。

7) 将样品加到NTA层析柱中，流速控制在15 ml/h左右，收集穿透部分，用于SDS/PAGE分析蛋白质的结合情况。

8) 层析用5倍NTA体积的GuNTA-0 Buffer洗，流速控制在30 ml/h左右。

9) 分别用5倍NTA体积GuNTA-20、GuNTA-40，GuNTA-60、GuNTA-100、GuNTA-500洗脱，流速在15 ml/ h左右，收集洗脱液，每管收集一个NTA体积。

10) 确定目标蛋白质在洗脱液中的分布情况。最为有效的方式是SDS/PAGE分析。也可以用Bradford 蛋白质测定试剂盒，快速确定蛋白质的含量，然后用SDS/PAGE分析蛋白质的分布。

11) 目标蛋白质需要进一步纯化需要根据蛋白质的用途确定。

12) 纯化的目标蛋白质需要复性，复性常用的手段可以参考有关手册确定的原则。

GuNTA-0 、20、40、60、100、500Buffer分别为浓度20 mM Tris-HCl pH7.9, 0.5 M NaCl, 10% Glycerol,6 M Guanidium HCl添加0、20、40、60、100、500 mM Imidazole。

C. NTA树脂的再生

NTA树脂在使用若干次数（3-5次）后，结合效率有所下降，可以用以下方法再生，提高树脂的使用寿命和蛋白质的结合效率。

NTA树脂再生前需要从层析柱下端流干所有溶液，估计出NTA的树脂体积，按下列次序将再生试剂加到层析柱里，在等上一步再生溶液流干后，再加下一步再生溶解。

用户需要自行准备25%、50%、75%、100%（v/v）乙醇和去离子水。 从层析柱下端流干所有溶液，用2倍NTA树脂体积的Stripping Solution I、2倍体积的去离子水、3倍体积的Stripping Solution II、1倍体积的25%乙醇、1倍体积的50%乙醇、1倍体积的75%乙醇、5倍体积的100%乙醇、1倍体积的75%乙醇、1倍体积的50%乙醇、1倍体积的25%乙醇、1倍体积的去离子水、5倍体积的Stripping Solution III、3倍体积的去离子水分别洗一遍。

如果立即使用，用5倍体积的Ni Charging Solution洗，再用10倍体积的平衡溶液（NTA-0Buffer或GuNTA-0 Buffer）洗；如果想长期储存，加入1倍体积的20%乙醇，4°C保存，使用前用5倍体积的Ni Charging Solution洗，再用10倍体积的平衡溶液（NTA-0Buffer或GuNTA-0 Buffer）洗

再生溶液配方：Stripping Solution I:  6M GuHCl, 0.2M acetic acid。Stripping Solution II: 2% SDS。        Stripping Solution III: 100 mM EDTA, pH 8.0。Ni Charging Solution: 100 mM NiSO4

  备注：产品信息可能会有优化升级。请以实际标签信息为准。

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标题:An LcMYB111-LcHY5 Module Differentially Activates an LcFLS Promoter in Different Litchi Cultivars

成员:Zhidan Xiao, Jing Wang, Nonghui Jiang, Chao Fan, Xu Xiang, Wei Liu

论文因子:5.6 发表期刊:INTERNATIONAL JOURNAL OF MOLECULAR SCIENCES pmid:38069137

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标题:A novel phage carrying capsule depolymerase effectively relieves pneumonia caused by multidrug-resistant Klebsiella aerogenes

成员:Cui Xiaohu, Du Bing, Feng Junxia, Feng Yanling, Fan Zheng, Chen Jinfeng, Cui Jinghua, Gan Lin, Fu Tongtong, Tian Ziyan, Zhang Rui, Yan Chao, Zhao Hanqing, Xu Wenjian, Xu Ziying, Yu Zihui, Ding Zanbo, Li Zhoufei, Chen Yujie, Xue Guanhua, Yuan Jing

论文因子:11 发表期刊:JOURNAL OF BIOMEDICAL SCIENCE pmid:37653407

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标题:Intervention effects of Trichinella spiralis excretory-secretory antigens on allergic asthma in mice

成员:Jing-Bo Zhen, Jin-Peng Zhang, Feng Sun, Li-Hao Lin, Yu-Heng Zhang, Rui-Biao Wang, Yang Han, Zhi-Xin Li, Yi-Xin Lu

论文因子:5.714 发表期刊:INTERNATIONAL IMMUNOPHARMACOLOGY pmid:37058749

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标题:The P-body component DECAPPING5 and the floral repressor SISTER OF FCA regulate FLOWERING LOCUS C transcription in Arabidopsis

成员:Wang Wanyi, Wang Chuanhong, Wang Yunhe, Ma Jing, Wang Tengyue, Tao Zhen, Liu Peipei, Li Shuai, Hu Yuanyuan, Gu Aiju, Wang Hui, Qiu Chunhong, Li Peijin

论文因子:12.085 发表期刊:PLANT CELL pmid:37220754

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标题:Cardiac patches made of brown adipose-derived stem cell sheets and conductive electrospun nanofibers restore infarcted heart for ischemic myocardial infarction

成员:Jinxin Li, Fengli Liu, Zhihao Ren, Guanghua Fu, Jizhen Shi, Naiyu Zhao, Yu Huang, Jingliang Su

论文因子:5.2 发表期刊:Frontiers in Microbiology pmid:37426000

注意：以上文献 仅供参考

镍-琼脂糖凝胶6FF

镍-琼脂糖凝胶6FF