β-半乳糖苷酶(β-GAL)活性检测试剂盒

产品名称: β-半乳糖苷酶(β-GAL)活性检测试剂盒

产品英文名:  β-galactosidase（β-GAL）Assay Kit

产品货号：BC2580           产地：北京市通州区马驹桥联东U谷8三楼

产品规格：50管/24样             产品商标：solarbio
保存与运输：4℃保存或-20℃保存；            参考价格：750
库存状态：现货                          
关键字: β-半乳糖苷酶检测试剂盒|β-GAL检测试剂盒|β-半乳糖苷酶|试剂盒

简要介绍：
β-GAL(EC 3.2.1.23)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，能够催化β半乳糖苷化合物中β半乳糖苷键水解，此外还具有转半乳糖苷的作用。β-GAL不仅可为植物的快速生长释放储存的能量，还能在正常的多糖代谢、细胞壁组分代谢以及衰老时细胞壁降解过程中催化多糖、糖蛋白以及半乳糖脂末端半乳糖残基的水解，释放自由的半乳糖。
β-GAL 分解对-硝基ben-β-D-吡喃半乳糖苷生成对-硝基ben酚，后者在400nm 有大吸收峰，通过测定吸光值升高速率来计算β-GAL 活性。

产品详细描述
产品内容：
提取液：液体50mL×1 瓶，4℃保存。
试剂一：粉剂×1 瓶，-20℃保存；临用前每瓶加入5mL 蒸馏水，充分溶解备用；用不完的试剂仍-20℃保存。
试剂二：液体15mL×1 瓶，4℃保存。
试剂三：液体80mL×1 瓶，4℃保存。
标准液：液体1ml×1支，4℃保存，5μmol/ml对硝基ben酚溶液。

产品说明：
β-GAL(EC 3.2.1.23)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，能够催化β半乳糖苷化合物中β半乳糖苷键水解，此外还具有转半乳糖苷的作用。β-GAL不仅可为植物的快速生长释放储存的能量，还能在正常的多糖代谢、细胞壁组分代谢以及衰老时细胞壁降解过程中催化多糖、糖蛋白以及半乳糖脂末端半乳糖残基的水解，释放自由的半乳糖。
β-GAL 分解对-硝基ben-β-D-吡喃半乳糖苷生成对-硝基ben酚，后者在400nm 有大吸收峰，通过测定吸光值升高速率来计算β-GAL 活性。

需自备的仪器和用品：
可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
操作步骤：
一、粗酶液提取：

1. 细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（10⁴ 个）：提取液体积（mL）为500~1000：1 的比例（建议500 万细菌或细胞加入1mL 提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30 次）；15000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2. 组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10 的比例（建议称取约0.1g 组织，加入1mL 提取液），进行冰浴匀浆。15000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
3. 标准液的处理：用试剂二将标准液稀释200、100、50、25、12.5、6.25、0nmol/ml.

• 测定步骤
• 分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长400nm，蒸馏水调零。
• 样本测定，（在EP管或96孔板中依次加入下列试剂）：

充分混匀，室温静置2min后， 400nm处测定吸光值A。△A=A测定管-A对照管

β-GAL 活性计算：
根据标准管的吸光度（x）和浓度（y，nmol/ml）建立标准曲线，将△A带入标准曲线中，计算样品生成的产物量（nmol/ml）。

1. 按样本蛋白浓度计算：

单位的定义：每mg 组织蛋白每小时产生1nmol 对-硝基ben酚定义为一个酶活力单位。
β-GAL 活力(nmol/h /mg prot)=(y×V 反总)÷(V 样×Cpr)÷T
=20×y÷Cpr
需要另外测定，建议使用本公司BCA 蛋白质含量测定试剂盒。

1. 按样本鲜重计算：

单位的定义：每g 组织每小时产生1nmol 对-硝基ben酚定义为一个酶活力单位。
β-GAL 活力(nmol/h /g 鲜重)＝(y×V 反总)÷(W×V 样÷V 样总)÷T
=20×y ÷W

1. 按细菌或细胞密度计算：

单位的定义：每1 万个细菌或细胞每小时产生1nmol 对-硝基ben酚定义为一个酶活力单位。
β-GAL 活力(nmol/h /10⁴ cell)= (y×V 反总)÷(500×V 样÷V 样总)÷T
=0.04×y
Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；V 反总：反应体系总体积，0.5mL；V 样：加入反应体系中样本体积，0.05mL；V 样总：加入提取液体积，1mL；W：样本质量，g； 500：细胞或细菌总数，500 万；T：反应时间，0.5h。


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