线粒体呼吸链复合体Ⅰ活性检测试剂盒
                                                                                              分光光度法

产品名称:：  线粒体呼吸链复合体Ⅰ活性检测试剂盒

产品英文名: Mitochondrial Respiratory Chain ComplexⅠActivity Assay Kit

产品货号：BC0510            产地：北京市通州区马驹桥联东U谷8三楼

产品规格：50管/48样             产品商标：solarbio
保存与运输：4℃保存或-20℃保存；            参考价格：2200
库存状态：现货                          
关键字：：   ：  ：  线粒体呼吸链复合体Ⅰ检测试剂盒|  线粒体呼吸链复合体Ⅰ|线粒体呼吸链|试剂盒

简要介绍：
复合体Ⅰ（EC 1.6.5. 3）又称 NADH-CoQ 还原酶或 NADH 脱氢酶，广泛存在于动物、植物、 微生物和培养细胞的线粒体中，是线粒体内膜中大的蛋白复合物。该酶催化一对电子从 NADH 传递给 CoQ，同时可使O2还原生成 O2.-，是呼吸电子传递链上产生O2.-的主要部位。 测定该酶活性，不仅可以反映呼吸电子传递链（ETC）状态，而且可以反映活性氧（ROS） 生成状态。

产品详细描述
产品内容：
提取液：液体25 mL×1瓶，4℃保存；  
试剂一：液体25 mL×1瓶，4℃保存；
试剂二：粉剂×1支，4℃保存；临用前加入2mL丙tong
试剂三：粉剂×1 支，-20℃保存；溶于1mL丙tong，可分装后-20℃保存。临用前再用丙tong100倍稀释后使用，现用现配。
试剂四：粉剂×1支，-20℃保存；临用前加入2mL蒸馏水，现配现用；   
工作液的配制：临用前将试剂二和试剂三1:1混合，现配现用。
产品说明：
复合体Ⅰ（EC 1.6.5. 3）又称NADH-CoQ 还原酶或NADH脱氢酶，广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞的线粒体中，是线粒体内膜中大的蛋白复合物。该酶催化一对电子从NADH传递给CoQ，同时可使O₂还原生成O^2-，是呼吸电子传递链上产生O^2.-的主要部位。测定该酶活性，不仅可以反映呼吸电子传递链（ETC）状态，而且可以反映活性氧（ROS）生成状态。
复合体Ⅰ能够催化NADH脱氢生成NAD⁺，在340nm下测定NADH的氧化速率计算出该酶活性的大小。
试验中所需的仪器和试剂：
紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL石英比色皿、研钵/匀浆器、丙tong、冰和蒸馏水。
操作步骤：
一、复合体的提取： 

1. 称取约0.1g组织或收集500万细胞，加入1.0 mL提取液，用匀浆器或研钵于冰上匀浆。
2. 4 ℃ 600 g离心10min。
3. 将上清液移另一离心管中，4 ℃ 11000 g离心15min。
4. 上清液即胞浆提取物，可用于测定从线粒体泄漏的复合体Ⅰ（此步可选做，可以判断线粒体提取效果）。
5. 在沉淀中加入400μL提取液，超声波破碎（功率20％，超声5秒，间隔10秒，重复15次），用于复合体Ⅰ酶活性测定，并且用于蛋白含量测定。

二、测定步骤：

1. 紫外分光光度计预热30min 以上，调节波长340nm，蒸馏水调零。
2. 试剂一37℃（哺乳动物）或25℃（其他物种）预热15min。
3. 操作表：在1mL石英比色皿中分别加入

三、复合体Ⅰ活力单位的计算：  
单位定义：每mg 组织蛋白每分钟消耗1 nmol 的NADH 定义为一个酶活力单位。
复合体Ⅰ活力（U/mg prot）=[ΔA×V 反总÷（ε×d）×10⁹]÷(V 样×Cpr) ÷T =1608×ΔA÷Cpr
V 反总：反应体系总体积，10^-3 L；ε：NADH 摩尔消光系数，6.22×10³ L / mol /cm；d：比色皿光径，1cm；V 样：加入样本体积，0.05 mL； T：反应时间，2min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL。
注意事项：

1. 为保证实验结果的准确性，需先取1-2个样做预实验，如果测定的吸光值过高（高于1.5），可用蒸馏水稀释上清液后再测定。计算结果时注意乘以稀释倍数。若ΔA大于0.4，需将样本稀释适当倍数（计算公式中乘以相应稀释倍数）；若ΔA偏小，则可以通过增加加入的样品体积来提高灵敏度。
2. 样品蛋白浓度需自行测定，推荐我公司BCA蛋白浓度测定试剂盒。由于提取液中含有蛋白，所以在测定样品蛋白浓度时需要减去提取液本身的蛋白含量。
3. 推荐使用样本蛋白浓度计算酶活，若用样本鲜重计算，则需加测胞浆提取物酶活，上清和沉淀酶活之和方为总酶活。
4. 本试剂盒试剂足够完成25管反应。
5. 附:使用样本重量计算公式：（样本检测数为25T/12S）

A、上清中复合体I活力的计算:
按样本鲜重计算：
单位的定义：每g组织在反应体系中每分钟消耗1 nmol NADH定义为一个酶活力单位。
复合体I活性（U/g）= [ΔA1×V 反总÷（ε×d）×10⁹]÷(W÷V提取×V样)÷T
                   =1608×ΔA1÷W。
ΔA1：上清测定值；V 反总：反应体系总体积，10^-3 L；ε：NADH 摩尔消光系数，6.22×10³ L / mol /cm；d：比色皿光径，1cm；V提取：加入提取液体积，1mL ；V 样：加入样本体积，0.05mL；T：反应时间，2 min；W：样本重量，g。
B、沉淀中复合体I活力的计算:
按样本鲜重计算：
单位的定义：每g组织在反应体系中每分钟消耗1 nmol NADH定义为一个酶活力单位。
复合体I活性（U/g）= [ΔA2×V 反总÷（ε×d）×10⁹]÷(W÷V提取×V样本)）÷T
                   =643×ΔA2÷W。

ΔA2：沉淀测定值；V 反总：反应体系总体积，10^-3 L；ε：NADH 摩尔消光系数，6.22×10³ L / mol /cm d：比色皿光径，1cm；V提取：沉淀重悬体积，0.4mL ；V 样：加入样本体积，0.05mL；T：反应时间，2 min；W：样本重量，g。
C、样本复合体I总活力的计算:
样本复合体I总活力即为上清中复合体I活力与沉淀中复合体I活力之和。
按样本鲜重计算：
复合体I（U/g 鲜重）=1608×ΔA1÷W +643×ΔA2÷W。

相关文献：

《GSK3β-mediated tau hyperphosphorylation triggers diabetic retinal neurodegeneration by disrupting synaptic and mitochondrial functions》 作者:Huazhang Zhu, Weizhen Zhang, Yingying Zhao, Xingsheng Shu, Wencong Wang, Dandan Wang, Yangfan Yang, Zhijun He, Xiaomei Wang & Ying Ying  期刊:Molecular Neurodegeneration 影响因子:8.274 PMID:30466464
《Weanling Offspring of Dams Maintained on Serine-Deficient Diet Are Vulnerable to Oxidative Stress》 作者:Liuqin He, Haiwen Zhang, and Xihong Zhou 期刊:Oxidative Medicine and Cellular Longevity 影响因子:4.868 PMID:30305866
《A Damaged Oxidative Phosphorylation Mechanism Is Involved in the Antifungal Activity of Citral against Penicillium digitatum》 作者:Qiuli OuYang, Nengguo Tao* and Miaoling Zhang 期刊:Frontier in Immunology 影响因子:4.259 PMID:29503638
《Age-dependent expression of the Vitamin D receptor and the protective effect of Vitamin D receptor activation on H2O2-induced apoptosis in rat intervertebral disc cells》 作者:TongTonga1ZhihuiLiub1HuaZhangcJingleiSuncDongxiaZhangdFengWangaDechaoMiaoaYongShen 期刊:Journal of Steroid Biochemistry and Molecular Biology 影响因子:3.785 PMID:30905826
《Roles of TRPA1 and TRPV1 in cigarette smoke -induced airway epithelial cell injury model》 作者:Muyun Wang,Yanbei Zhang,Mengmeng Xu,HaiZhang,Yuqing Chen,Kian Fan Chung,Ian M.Adcock,Feng Li 期刊:Free Radic. Biol. Med. 影响因子:5.657 PMID:30639616
《Nitrogen-doped graphene quantum dots (N-GQDs) perturb redox-sensitive system via the selective inhibition of antioxidant enzyme activities in zebrafish.》 作者:Shun Deng,Ailing Fu,Muhammad Junaid,Yan Wang,Qian Yin,Chen Fu,Li Liu,Dong-Sheng Su,Wan-Ping Bian,De-Sheng Pei 期刊:Biomaterials 影响因子:10.273 PMID:30925289
《The PI3K/Akt/GSK-3β/ROS/eIF2B pathway promotes breast cancer growth and metastasis via suppression of NK cell cytotoxicity and tumor cell susceptibility》 作者:Fengjiao Jin, Zhaozhen Wu, Xiao Hu, et al. 期刊:Cancer Biol Med 影响因子:4.467 PMID:31119045
《Promotion of Mitochondrial Biogenesis via Activation of AMPK‐PGC1ɑ Signaling Pathway by Ginger (Zingiber officinale Roscoe) Extract, and Its Major Active Component 6‐Gingerol》 作者:Xiaohong Deng , Siwei Zhang,  Junzhen Wu , Xianjun Sun , Ziyin Shen,  Jingcheng Dong  ,Jianhua Huang 期刊:Food Chemistry 影响因子:5.399 PMID:31369153