植物中脂氧合酶 (LOX)活性检测试剂盒

LOX 广泛存在于植物组织中，催化不饱和脂肪酸氧化反应，导致膜脂过氧化。在植物的生长发育、成熟衰老及逆境胁迫过程中具有重要作用。 LOX 催化亚油酸氧化，氧化产物在 234nm 处有特征吸收峰；测定 234nm 吸光度增加速率，来计算 LOX 活性。

植物中脂氧合酶 (LOX)活性检测试剂盒

一、粗酶液提取：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 试剂一）进行冰浴匀浆。16000g，4℃离心 20min，取上清置冰上待测。二、测定： 1. 分光光度计/酶标仪预热 30 min 以上，调节波长到 234 nm，蒸馏水调零。 2. 试剂二在 25℃水浴中预热 30 min 以上。 3. 空白管：依次在微量石英比色皿/96 孔板中加入 20μL 蒸馏水、160μL 试剂二和 20μL 试剂三，迅速混匀后于 234nm 比色，记录 15s 和 75s 的吸光值，分别记为 A1 和 A2。 4. 测定管：依次在微量石英比色皿/96 孔板中加入 20μL 上清液、160μL 试剂二和 20μL 试剂三，迅速混匀后于 234nm 比色，记录 15s 和 75s 的吸光值，分别记为 A3 和 A4。三、LOX 活性计算： a. 使用微量石英比色皿测定的计算公式如下（1） 按照蛋白浓度计算活性单位定义：25℃中每毫克蛋白每分钟催化吸光值变化 0.001 个单位为 1 个酶活单位。 LOX (U/mg prot) = [(A4－A3)－(A2－A1)]×V 反总÷(Cpr×V 样)÷T×1000 = 10000×[(A4－A3)－(A2－A1)]÷Cpr Solarbio Beijing Solarbio Science & Technology Co., Ltd /82 Http://www.solarbio。。ｃｏｍ 第 2页，共 2 页（2） 按照样本质量计算活性单位定义：25℃中每克组织每分钟催化吸光值变化 0.001 个单位为 1 个酶活单位。 LOX (U/g) = [(A4－A3)－(A2－A1)]×V 反总÷(W×V 样÷V 样总)÷T×1000 = 10000×[(A4－A3)－(A2－A1)]÷W Cpr：上清液蛋白浓度，mg/mL，需另外测定，建议使用本公司 BCA 蛋白质含量测定试剂盒； V 反总：反应体系总体积，200μL=2×10-4L；V 样：加入反应体系中上清液体积，20μL=0.02mL；W ：样品质量，g；V 样总：上清液总体积，1mL；T：反应时间。 b. 使用 96 孔板测定的计算公式如下（1） 按照蛋白浓度计算 活性单位定义：25℃中每毫克蛋白每分钟催化吸光值变化 0.001 个单位为 1 个酶活单位。 LOX (U/mg prot) = [(A4－A3)－(A2－A1)]×V 反总÷(Cpr×V 样)÷T×1000 = 10 000×[(A4－A3)－(A2－A1)]÷Cpr （2） 按照样本质量计算 活性单位定义：25℃中每克组织每分钟催化吸光值变化 0.001 个单位为 1 个酶活单位。 LOX (U/g) = [(A4－A3)－(A2－A1)]×V 反总÷(W×V 样÷V 样总)÷T×1000 = 10 000×[(A4－A3)－(A2－A1)]÷W Cpr：上清液蛋白浓度，mg/mL，需另外测定，建议使用本公司 BCA 蛋白质含量测定试剂盒； V 反总：反应体系总体积，200μL=2×10 -4L；V 样：加入反应体系中上清液体积，20μL=0.02mL；W ：样品质量，g；V 样总：上清液总体积，1mL；T：反应时间。

植物中脂氧合酶 (LOX)活性检测试剂盒

试剂一：液体×1 瓶，4℃保存。试剂二：液体×1 瓶，4℃保存。试剂三：粉剂×1 瓶，4℃保存。临用前加入 2mL 试剂二，充分溶解。