细胞自噬染色检测试剂盒(MDC法) solarbio

产品说明：
自噬(autophagy)是细胞受到刺激后吞噬自身的细胞质或细胞器，终将吞噬物在溶酶体内降解的过程，自噬体(autophagosome)为双层膜包被的圆形或椭圆形结构，内含细胞质、长寿蛋白质和异常蛋白聚集物，损伤或多余细胞器如线粒体、粗面内质网和微体、病毒和细菌等。单丹磺酰尸胺(Dansylcadaverine,MDC )是一种荧光色素，是嗜酸性染色剂，通常被用于检测自噬体形成的特异性标记染色剂，其检测激发滤光片波长 355nm。阻断滤光片波长 512nm。细胞自噬染色检测试剂盒(MDC 法)，适用于培养细胞的自噬染色，又称为 MDC 染色液，可与EB 合用双染。

自备材料：
荧光显微镜、低速离心机、EB 、载玻片、盖玻片

操作步骤(仅供参考)：
(一)、MDC单独染色：
1、 用去离子水稀释10×Wash buffer1×。
2、 800g离心5min，收集细胞，用300～400μl的1×Wash buffer清洗细胞1次，弃上清。
3、 加入适量的1×Wash buffer重悬细胞，计数并调节细胞浓度106/ml。
4、 取适量90μl的细胞悬液新的EP管中，加入10μl的MDC Stain，轻轻混匀。
5、 室温避光染色15～45min。
6、 800g离心5min，收集细胞，用300～400μl的1×Wash buffer清洗细胞2次，弃上清。
7、 加入100μl的Collection buffer重悬细胞，滴加于载玻片上并加盖玻片。
8、 荧光显微镜下观察(激发滤光片波长355nm，阻断滤光片波长512nm)，计数并拍照。

注:贴壁细胞可以不消化，直接去除培养液，用1×Wash buffer清洗后进行染色。MDC的量根据细胞数量进行调整。染色时间可适当延长根据染色结果进行调整，染色结束后，用1×Wash buffer清洗观察即可，不加Collection buffer。

(二)、与EB双染色：
1、用去离子水稀释10×Wash buffer1×。
2、800g离心5min，收集细胞，用300～400μl的1×Wash buffer清洗细胞1次，弃上清。
3、加入适量的1×Wash buffer重悬细胞，计数并调节细胞浓度106/ml。
4、取适量90μl的细胞悬液新的EP管中，分别加入10μl的MDC Stain和0.2μM EB染色液，轻轻混匀。
5、滴加于在玻片上，室温避光染色15～30min，加盖玻片。
6、荧光显微镜下观察(激发滤光片波长512nm)，计数并拍照。

细胞自噬染色检测试剂盒(MDC法) solarbio