DM3300 磁珠法提口腔拭子DNA试剂盒 说明书仅供参考

口腔粘膜上皮细胞在裂解液的作用下释放出基因组DNA，利用硅基磁珠特异地吸附基因组DNA，在漂洗液的作用下清洗除去吸附在磁珠上的少量杂质，在洗脱液的作用下得到基因组DNA。可快速、简单的从口腔拭子中分离纯化总DNA，最大限度的保留了提取基因组DNA的完整性和纯度，可用于酶切，PCR等分子生物学下游实验。
优势：磁珠法提取口腔细胞基因组DNA具有传统柱式法无法-比拟的优势。与柱式法相比大大缩短了实验时间。具有操作简单，用时短，安全无毒，可完成自动化提取等优势。
操作步骤（仅供参考）：
漂洗液在使用前请检查是否已加入无水乙醇，加入体积请参照瓶上标签（50T/100T的漂洗液需要单独加入26.25mL/52.5mL的无水乙醇）。
蛋白酶K溶液配置：50T包装取1mL溶酶液加入到蛋白酶K-粉末中，配成蛋白酶K溶液，配好的蛋白酶溶液-20℃保存；100T包装取2mL溶酶液加入到蛋白酶K-粉末中，配成蛋白酶K溶液，配好的蛋白酶溶液-20℃保存。
1、取样：
轻轻旋转拭子，在口腔内壁擦拭10-20次，将拭子放入2mL离心管中,加入600μL裂解液和20μL蛋白酶K，折断手柄，震荡1min。
2、将上述离心管放入75℃水浴锅中，水浴20min。
3、用镊子将拭子夹出至管口时，挤压拭子，尽可能多的获得裂解液。
4、将上述裂解液用移液器吸到新的1.5mL离心管中并加入600μL的无水乙醇，用移液枪吹吸混匀。
5、加入20μL磁珠，涡旋震荡混匀，室温静置5min。将1.5mL离心管置于磁力架中进行磁分离，待磁珠完-全吸附于磁力架后，去除上清，用移液枪沿管壁尽量将液体吸除干净，注意不要吸到磁珠。
6、加入600μL的漂洗液（使用前请检查是否已加入乙醇），用涡旋振荡器震荡混匀。将离心管放置于磁力架中，待磁珠完-全吸附于磁力架后，去上清，用移液枪沿管壁尽量将液体吸除干净，注意不要吸到磁珠。
7、打开离心管的盖子，于室温中静置干燥1min注意干燥时间不能太久，会使得磁珠上的DNA不易被洗脱。
8、加洗脱液40μL，涡旋混匀，室温静置5min，将离心管置于磁力架中，待磁珠完-全吸附于磁力架后，用移液枪沿管壁将溶液吸到新的1.5ml离心管中，注意不要吸到磁珠，所得溶液即为纯化后的基因组DNA，放于-20℃保存。
注意事项：
1、磁珠使用前用涡旋震荡器震荡混匀。
2、磁珠置于4℃冰箱保存。
3、冷冻，干燥和离心等操作会引起磁珠团聚，不易于重悬和分散，并影响磁珠表面功能基团的化学活性。
4、步骤3很关键，用镊子将拭子夹出至管口时，拭子在管口挤压不充分，没有获得足够的裂解液，很有可能造成提取浓度不高。
5、样品应避免反复冻融，否则会导致提取量下降。