DM1170M 细菌(G+)基因组DNA试剂盒(磁珠法) 说明书仅供参考

磁珠法提细菌基因组DNA剂盒，使细菌在裂解液中裂解完-全后，在结合液的作用下促进基因组DNA与磁珠特异性地识别和高效的结合，经漂洗液漂洗后可最大限度去除杂质蛋白及其它有机化合物，在外加磁场力的作用下能从样品中分离出DNA。提取的基因组DNA浓度高，纯度优良，可以应用到各类分子生物学下游实验，适用于革兰氏阳性菌。
优势：磁珠法提取细菌基因组DNA具有传统柱式法无法-比拟的优势。与柱式法相比大大缩短了实验时间且提取到高质量的细菌基因组DNA可以应用到各类分子生物学下游实验。具有操作简单，用时短，安全无毒，可完成自动化提取等优势。
操作步骤（仅供参考）：
一、注意事项
1.使用前请先在漂洗液加入异丙醇/无水乙醇，加入试剂体积请参照瓶体上的标签（50T/100T的漂洗液1需单独加入25mL/50mL的异丙醇，50T/100T漂洗液2需单独加入18.75mL/37.5mL的无水乙醇）。
2.溶菌酶溶液配置：取7.5mL溶酶液加入到750mg溶菌酶粉末中，配成100mg/mL的溶菌酶溶液，配好的溶菌酶溶液-20℃保存。
3.蛋白酶K溶液配置：取1mL溶酶液加入到20mg蛋白酶K-粉末中，配成20mg/mL的蛋白酶K溶液，配好的蛋白酶溶液-20℃保存。
二、操作方法（仅供参考）
1.于EP管中加入培养过夜的菌液1mL，12000rpm离心1min，尽量吸除上清。
2.加入500μL70%乙醇重悬菌体，冰浴20min，12000rpm，离心1min，尽量吸除上清。
3.加入溶菌酶的缓冲液200μL（20mMTris,pH8.0；2mMNa2-EDTA；1.2%TritonX-100）和150μL溶菌酶溶液37℃处理1h，当菌量多时可延长孵育至3h，每隔20min上下颠倒混匀。
4.12000rpm离心1min，尽量吸除上清。
5.向菌体中加入200μL裂解液，涡旋震荡或用移液枪反复吹吸菌体，使菌体充分悬浮。加入20μL蛋白酶K，充分颠倒混匀，于65℃水浴锅中消化30min，每隔10min上下颠倒混匀，菌液呈现清亮即消化完-全。
6.将EP管从水浴锅中取出，待温度降至室温后加入2μLRNaseA，移液枪吹吸混匀，室温静置10min。
7.加入130μL结合液，用移液枪吹吸混匀，于65℃水浴锅中水浴10min。
8.将EP管从水浴锅中取出，待温度降至室温后加入20μL磁珠，涡旋震荡混匀，室温静置5min。将EP管置于磁力架中进行磁分离，待磁珠完-全吸附于磁力架后，用移液枪沿管壁尽量将液体吸除干净，注意不要吸到磁珠。
9.加入500μL的漂洗液1（50T使用前加入25mL的异丙醇，100T使用前加入50mL的异丙醇），用涡旋振荡器震荡混匀。将离心管放置于磁力架中，待磁珠完-全吸附于磁力架后，用移液枪沿管壁尽量将液体吸除干净，注意不要吸到磁珠。
10.重复第9步操作。
11.加入500μL的漂洗液2（使用前检查是否加入无水乙醇），用涡旋振荡器震荡混匀。将离心管放置于磁力架中，待磁珠完-全吸附于磁力架后，用移液枪沿管壁尽量将液体吸除干净，注意不要吸到磁珠。
12.打开离心管的盖子，于室温中静置干燥2min，观察离心管壁和底部液体挥发完-全且磁珠表面呈光滑的亮面即可，注意干燥时间不能太久，会使得磁珠不易被洗脱。
13.洗脱液于60℃水浴锅中水浴5min后，于上述离心管中加入50-100μL，涡旋混匀，将离心管置于磁力架中，待磁珠完-全吸附于磁力架后，用移液枪沿管壁将溶液吸到新的离心管中，注意不要吸到磁珠。
14.12000rpm离心1min，所得溶液即为纯化后的基因组DNA样品，放于-20℃保存。
注意事项：
1、磁珠使用前用涡旋震荡器震荡混匀。
2、磁珠置于4℃冰箱保存。
3、冷冻，干燥和离心等操作会引起磁珠团聚，不易于重悬和分散，并影响磁珠表面功能基团的化学活性。
4、使用新鲜的菌液提取的基因组质量较好。
5、溶菌酶使用时最好现用现配。
样品应避免反复冻融，否则会导致提取量下降。