告别荧光淬灭焦虑:索莱宝抗衰减封片剂实战指南
北京索莱宝(Solarbio)是国内的生化试剂供应商,其封片剂产品线覆盖了免疫荧光、免疫组化、常规病理等多种实验场景。根据索莱宝公开渠道的产品信息,以下对其主要封片剂产品的作用、操作方法和维护注意事项进行系统介绍。
一、主要产品线概览
索莱宝的封片剂产品主要包括以下几类:
抗荧光衰减封片剂(S2100):基础型,以甘油为基础,加入抗荧光衰减剂,适用于荧光组织和细胞样品的封片。规格有5ml、25ml、100ml,2-8℃保存,有效期1年。
抗荧光衰减封片剂·含DAPI(S2110/S2115):在基础型上内置DAPI核染料,封片同时完成细胞核蓝色荧光标记,激发/发射波长为360nm/460nm。S2110需-20℃保存,S2115同样-20℃避光保存,有效期均为1年。
抗荧光衰减封片剂·含Hoechst33342(S2111):内含Hoechst33342核染料,最大激发波长346nm,最大发射波长460nm,对细胞毒性较低,适用于活细胞和固定细胞。
甘油明胶封片剂(S2150):参考经典Kaiser方法配制的水性封片液,主要成分为明胶和甘油,经改良不含剧毒苯酚,适用于常规切片、涂片封片。-20℃保存,有效期1年。
中性树胶(G8590):天然树脂型封藏剂,折光率与玻璃近似,干燥后凝结为透明无色固体,不易变黄、收缩或纹裂,适用于HE染色等常规病理切片的长期保存。室温避光保存,有效期2年。
二、封片剂的核心作用
封片剂在显微观察实验中承担着多重关键功能:
1.抑制荧光淬灭,延长观测窗口
荧光染料在激发光照射下会发生氧化分解,导致荧光信号快速减弱甚至消失(即荧光淬灭)。索莱宝抗荧光衰减封片剂中含有的抗淬灭成分可清除自由基、阻断氧化反应,显著延缓淬灭过程。封片后样品在4℃或-20℃避光条件下可保存2-3周,荧光信号依旧清晰稳定。
2.固定样本,保护结构完整性
封片剂具有一定粘性,能将盖玻片与载玻片牢固粘合,避免样本在操作或观测过程中发生移位、变形。同时其基质成分可包裹样本组织或细胞,减少外界环境(湿度、温度变化)对样本结构的破坏。
3.提升成像清晰度
优质封片剂的折射率与玻璃、样本介质相匹配,可降低光线在盖玻片-样本-物镜间的散射和折射,提升图像对比度和清晰度,使细胞结构更加分明,特别适配高倍镜、油镜观察与荧光成像。
4.辅助长期保存
对于水性封片剂(如甘油明胶),配合封边剂使用可密封盖玻片边缘,防止溶剂蒸发与空气氧化,延长样本保存时间。树脂型封片剂(如中性树胶)固化后稳定性强,可满足长期归档需求。
三、操作方法
不同类型的封片剂操作略有差异,以下分别介绍:
(一)抗荧光衰减封片剂(S2100/S2110/S2111/S2115)
贴壁细胞样品(爬片)
完成免疫荧光染色后,吸尽液体,用吸水纸小心吸去背面和边缘多余液体(注意不要触碰细胞面)。
在载玻片上滴加一滴封片剂(约20-50μL),将爬片有细胞的一面朝下,轻轻覆盖在封片剂上。
轻压爬片使液体均匀展开,确保无气泡产生,即可通过荧光显微镜观察。
组织切片
染色完毕后吸尽液体,在组织切片上滴一滴封片剂(约20-40μL,根据组织大小调整)。
从一侧缓慢放下盖玻片,利用液体毛细作用自然铺展,避免气泡。
用镊子轻轻挤压盖玻片边缘,排出残留气泡,即可观察。
孔板内原位封片(高通量筛选)
吸尽孔板内培养基或染色液体,每孔滴加数滴封片剂(96孔板约30-50μL)。
适当倾斜孔板,利用液体表面张力使封片剂充分铺展,覆盖整个孔底细胞。
敞口静置3-5分钟,让封片剂与细胞充分接触并排出气泡,直接在倒置显微镜下观察拍摄。
(二)甘油明胶封片剂(S2150)
该封片剂在温度较低时呈固态,使用前须在37-50℃温育,待溶解后方可使用。
操作方法与抗荧光衰减封片剂类似:染色完毕后吸尽液体,滴一滴于载玻片上,盖上盖玻片,尽量避免气泡,随后通过显微镜观察。
(三)中性树胶(G8590)
在载玻片中央滴2-3滴树胶液(注意要滴在一起,否则容易产生气泡)。
慢慢放上盖玻片,轻轻挤压,树胶液会向外侧扩散至整个镜片。
通风晾几个小时后,用棉球蘸透明剂或松节油擦净镜片边缘多余的树胶,再放在通风处晾干即可。
四、维护与注意事项
1.储存条件严格把控
抗荧光衰减封片剂(S2100):2-8℃保存,有效期1年。
含DAPI/Hoechst的封片剂(S2110/S2111/S2115):-20℃避光保存,有效期1年。
甘油明胶封片剂(S2150):-20℃保存,有效期1年;短期使用可放2-8℃。
中性树胶(G8590):室温避光保存,有效期2年。
避免反复冻融,以免成分失效。
2.避光保存与及时观测
荧光物质均易发生衰减,即使使用了抗衰减封片剂,染色后的样品仍宜避光保存。封片后若不立即观测,需用锡箔纸包裹避光,短期存放于4℃冰箱,长期保存建议置于-20℃,并尽量减少取出次数。
3.操作手法避免气泡
滴加封片剂用量需适中:过少会导致盖玻片边缘产生气泡,强行按压易损伤样本;过多会污染样本、推动组织移位,且高倍油镜工作距离偏短,过量封片剂会导致无法成像。
盖玻片覆盖时应采用倾斜缓慢放下的方式,从一侧逐渐向另一侧推进,利用液体张力排出空气。
少量气泡可通过轻压盖玻片排出;若气泡较多,水性封片剂可水洗后重新操作,树脂型可浸入二甲苯取下盖玻片重新封片。
4.封边处理延长保存
甘油明胶等水性封片剂固化硬度不足,封片后需用指甲油、沥青胶等封边剂涂抹盖玻片四周密封,隔绝空气蒸发,可有效延长样本保存时间。
5.安全防护
操作时应穿好实验服,佩戴一次性手套和口罩,避免皮肤接触或吸入。部分封片剂含有的化学试剂具有一定刺激性。
6.选型建议
荧光实验优先选择抗荧光衰减封片剂;若需同时染核,可选含DAPI或Hoechst33342的版本。
常规HE染色等需长期归档的石蜡切片,优先选择中性树胶等树脂型封片剂。
脂肪染色、冰冻切片等不耐受有机溶剂的样本,应选择甘油明胶等水性封片剂。
7.产品适用范围
索莱宝封片剂产品仅供科研使用,请勿用于医药、临床诊断或治疗、食品及化妆品等用途,请勿存放于普通住宅区。